1.Подготовка электрофоретической камеры к электрофорезу.

• Установить камеру строго вертикально

• Заполнить кюветы камеры буферным раствором так, чтобы уровень в них был одинаковым

• Смочить буферным раствором полоски носителя. В качестве носителя используют хромотографическую бумагу, ацетатцеллюлозную пленку.

• Натянуть равномерно между кюветными отделениями полоски носителя. При натягивании концы полосок носителя не следует погружать в буферный раствор, в котором находятся электроды

• Нанести сыворотку на предварительно отмеченные участки у катода полосы носителя, при помощи аппликатора

• Закрывают плотно крышку камеры, включают прибор

2.Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови осуществляют при комнатной температуре в течение 20 – 40 минут. По окончании электрофореза отключают прибор, из камер извлекают полоски носителя (электрофореграммы).

3. Окраска электрофореграмм.

Помещают электорофореграмму в развернутом виде на дно эмалированной посуды и медленно приливают краситель, выдерживают 5 – 10 минут. Красители применяют для выявления белковых фракций. Причем применяют те красители – индикаторы (бромфиноловый синий, амидо черный), который непосредственно связываются с белками.

4.Удаление избытка красителя с электрофореграммы.

Для удаления не связавшегося белком красителя электрофореграммы, промывают 3% раствором уксусной кислоты до тех пор, пока промывная жидкость не будет бесцветной.

5.Количественная обработка электрофореграммы осуществляется фотометрически или денситометрически .

При фотометрической обработке электрофореграммы разрезают на полоски по числу фракций. Каждую фракцию помещают в пробирку, заливают элюирующим расвором, встряхивают, т.е. извлекают краситель с белковой фракцией, получается окрашенный раствор, после чего измеряют его оптическую плотность на фотометре против элюирующего раствора.

Величины оптической плотности каждой фракции складывают и сумму принимают за 100%. Затем рассчитывают процентное содержание каждой фракции сыворотки.

При денситометрии электрофореграммы сначала просветляют, после чего денситометр (прибор) сканирует картину разделения фракций сыворотки в проходящем монохромотическом световом потоке. Записанная прибором кривая позволяет судить о числе фракций и о содержании в них белка. С помощью интегрального устройства осуществляется количественная обработка картины разделения фракций белков. Осуществляется в автоматическом режиме.

Задача №21.

В лабораторию был доставлен раствор кислоты. Лаборанту необходимо определить концентрацию ионов. Какое оборудование при этом применяется, его принцип действия? Составьте алгоритм определения концентрации ионов в исследуемом растворе.

Эталон ответа к задаче №21.

Для измерения концентрации ионов водорода потенциометрическим методом используется прибор pH- метр.

Принцип действия pH – метра основан на преобразовании ЭДС электродной системы в постоянный ток, пропорциональный измеряемой величины. Потенциометрический метод определения pH сводится к измерению ЭДС электродной системы, состоящей из двух электродов, а именно: из электрода сравнения (потенциал которого известен) и индикаторного электрода (потенциал которого зависит от концентрации ионов водорода в растворе). При погружении электродов в исследуемый раствор между ними возникает разность потенциалов, которая преобразуется в ЭДС. В современных приборах pH-метрах разница в потенциалах прокалибрована в единицах pH.

Алгоритм определения концентрации ионов водорода на pH-метре:

1. Производят настройку прибора по буферным растворам, выпускаемые специально для pH-метрии

• Перед погружением в буферный раствор электроды промывают дистиллированной водой, избыток воды с электродов убирают фильтровальной бумагой. Ручкой «Температура раствора» устанавливают температуру 20^◦

• Электроды погружают в буферный раствор с температурой 20^◦ , нажимают кнопку «pH», ручкой «Калибровка» устанавливают значение pH буферного раствора.

2.Измерение pH исследуемого раствора:

• Промывают электроды дистиллированной водой. Избыток воды с электродов убирают фильтровальной бумагой. Ручкой «Температура раствора» устанавливают температуру 20^◦

• Погружают электроды в исследуемый раствор, нажимают кнопку «pH» и производят отсчет по шкале прибора

• По окончании работы электроды погружают в дистиллированную воду, прибор выключают

Задача №22.

Лаборант при исследовании холестерина в контрольной сыворотке получил результат 4,7^ммоль/_л.

В паспорте к контрольной сыворотке даны следующие данные: X =4,8^ммоль/_л , S=0,13^ммоль/_л при использовании того же метода. Оцените работу лаборанта при поведении межлабораторного контроля качества. Контрольная карта, ее построение и назначение.

Эталон ответа к задаче №22.

Р абота лаборанта оценивается путем расчета индекса среднеквадратичного отклонения по формуле: S_лаб= ^{Xлаб – X} = ^{4,7 – 4,8} =0,7

S 0,13

S_лаб от 0,5 до 1 – работа лаборанта хорошая.

Алгоритм построения контрольной карты:

• Контрольная карта представляет собой график, где на оси абсцисс откладывают дни исследований, на оси ординат – результат (концентрация) определяемого компонента в контрольном материале

• З атем через середину оси ординат проводят параллельно оси абсцисс линию, соответствующую среднеарифметической величины (X), а параллельно этой линии вверх и вниз от средней величины линии, соответствующие контрольным пределам X±1S, X±2S, X±3S.

• Наносят на карту каждый результат исследования контрольного материала в виде точки, после чего точки соединяют между собой.

Назначение: контрольная карта предназначена для оценки качества работы лаборатории, при проведении текущего контроля.