Эталон ответа к задаче №26.
Калибровочный график строится на миллиметровой бумаге. Масштаб на оси координат подбирается так, чтобы прямая проходила через начало координат под углом 45 градусов. На оси абсцисс откладываются концентрации стандартных растворов, а на оси ординат соответствующие им значения оптической плотности.
Через точки пересечения проводят прямую линию.
Градуировочная кривая предназначена для определения концентрации вещества в исследуемом растворе, исходя из его оптической плотности.
Фотометрические определения.
Сущность фотометрических определений состоит в проведении фотометрической реакции с целью получения окрашенных растворов с последующим измерением их оптической плотности на фотометре. Фотометрическую реакцию проводят для тех веществ, которые не обладают собственным поглощением, т.е при растворении дают бесцветные растворы.
При проведении фотометрической реакции анализируемое вещество действием соответствующего реагента переводят в прочное окрашенное соединение, которое будет поглощать световой поток определенной длины волны.
К фотометрической реакции предъявляются следующие требования, а именно:
- реакция должна протекать мгновенно, интенсивность окраски растворов должна быть пропорциональна концентрации анализируемого вещества, окраска растворов должна быть устойчивой, окрашенные растворы должны подчиняться закону Ламберта-Бера.
Задача №27
Показатели оптической плотности опытной и стандартной проб при определении общего белка следующие:
Еоп=0,157; Ест=0,142, концентрация общего белка в стандартном растворе равна 59г/л.
Рассчитайте концентрацию общего белка в исследуемом растворе с помощью коэффициента пересчета.
Абсорбционные фотометрические методы анализа, их сущность.
Эталон ответа к задаче №27
Концентрация общего белка в исследуемом растворе равна:
Сис= Еоп/Ест *Сст= 0,157/0,142*59= 65г/л
Сущность фотометрических методов анализа состоит в способности молекул определяемого вещества избирательно поглощать свет определенной длины волны, т.е. монохроматическое излучение.
В фотометрии обычно используется область максимального поглощения монохроматического излучения видимого участка спектра, что позволяет определять вещества в растворе в присутствии с другими веществами, которые не будут поглощать данное излучение.
При пропускании светового потока через окрашенный раствор, часть светового потока поглощается раствором, т.е. интенсивность светового потока уменьшается.
В основе фотометрического метода анализа лежит основной закон поглощения света Ламберта-Бугера-Бера, который гласит следующее:
Оптическая плотность раствора прямо пропорциональна концентрации раствора поглощающего вещества, толщине слоя раствора и молярному коэффициенту поглощения:
Д (Е)=ε * с * h
Молярный коэффициент представляет собой оптическую плотность одномолярного раствора вещества при толщине слоя в 1см. Он зависит от природы вещества, поглощающего излучение и от длины волны.
Задача №28
Дан исследуемый раствор железа (III) кроваво-красного цвета. Необходимо определить содержание железа в этом растворе фотометрически. Измерение проводится при длине волны 540нм в кювете толщиной 0,5см. Назовите, что не хватает для определения железа в исследуемом растворе? Составьте алгоритм Ваших действий.
Фотометрические определения, последовательность их выполнения.
Правила работы с кюветами.
Эталон ответа к задаче №28
Для определения железа в исследуемом растворе не хватает градуировочной кривой, построенная по результатам стандартного ряда окрашенных растворов железа (ш).
Алгоритм определения железа в исследуемом растворе:
Подготовить фотометр к работе путем нажатия клавиши «Д» 2 раза с интервалом 30сек.
Измерить оптическую плотность исследуемого раствора железа. Для чего:
- установить ручкой длину волны 540нм. Заполнить кюветы толщиной 0,5см, одну кювету дистиллированной водой и ставят в дальнее гнездо кюветодержателя, другую кювету-исследуемым раствором и ставят в ближнее гнездо кюветодержателя.
Закрывают крышку кюветного отделения. При этом ручка перемещения кювет находится крайнем левом положении. Нажимаем на клавишу «Д» и выбираем режим измерения. «А-оптическая плотность», нажимаем на клавишу «#», появляется «Градуировка», а затем «А=0,00». Переводим ручку перемещения кювет в крайнее правое положение и считаем значение оптической плотности исследуемого раствора.
- отмечают значение оптической плотности исследуемого раствора на оси ординат градуировочной кривой, проводят линию параллельно оси абсцисс до пересечения с кривой, после чего опускают перпендикуляр на ось абсцисс и определяют концентрацию железа в исследуемом растворе.
Фотометрическое определение для каждого анализируемого вещества проводят в следующей последовательности:
- готовят стандартный ряд окрашенных растворов из эталонного для построения градуировочной кривой, выбирают кюветы по окраске раствора для измерения поглощения;
- выбор светофильтра (хроматора) по правилу дополнительных цветов, которое состоит в том, что при наложении цвета окрашенного раствора на цвет светофильтра, дает ощущение в глазу белого цвета.
- измеряют оптическую плотность при выбранной длине волны и светофильтре.
- построение градуировочной кривой, по которой будут определять содержание вещества в исследуемом растворе
- приготовление исследуемого раствора по той же методике, по которой готовят стандартный ряд окрашенных растоворов
- измерение оптической плотности исследуемого раствора при том же светофильтре и кювете, при которых измерялась оптическая плотность стандартного ряда окрашенных растворов.
- определение содержания концентрации вещества в исследуемом растворе по градуировочной кривой.
Правила работы с кюветами.
Заполняют кюветы раствором до метки.
Перед каждым измерением кювету ополаскивают 2 раза небольшими порциями нового раствора.
Ставят кювету в кюветодержатель строго вертикально, беря их за ребра.
Нельзя наклонять заполненные кюветы и касаться их боковых поверхностей
Перед установкой кювет с раствором в кюветодержатель их боковые стенки протирают фильтровальной бумагой
Задача №29
Представлена контрольная карта исследования хлоридов в контрольном образце.
Оцените результаты лабораторных исследований. Статистическая обработка результатов лабораторных исследований.
Эталон ответа к задаче №29
Оценку полученных результатов исследования хлоридов на контрольной карте производит с использованием предупредительных и контрольных критериев.
П редупредительные критерии:
6 результатов подряд находятся на одну сторону от среднеарифметической линии X
6 результатов подряд повышаются или понижаются
3 результата подряд находятся за пределами + 1S
1 результат находится за пределами + 2S
Контрольные критерии:
8 результатов подряд находятся по одну сторону от среднеарифметической линии X
5 результатов подряд находятся за пределами + 1S
3 результата подряд находятся за пределами + 2S
1 результат находится за пределами + 3S
На представленной карте 1 результат находится за пределом + 3S, следовательно, результаты лабораторных исследований ставятся под сомнение и в отделении не выдаются. Проведение анализов у больных возможно только после выявления причины ошибки и устранения ее.
Статистическая обработка результатов лабораторных исследований производят следующим образом:
По результатам лабораторных исследований рассчитывают:
С реднеарифметическую величину X
Н аходят разницу между истинным значением и среднеарифметической величиной X-X
Рассчитывают среднее квадратичное отклонение S
О пределяют контрольные пределы Х + 1S; Х + 2S; Х + 3S.
И сключают результаты, попавшие за пределы Х + 2S
П роизводят перерасчет Х и S до тех пор, пока результаты не будут выходить за пределы Х + 2S
Рассчитывают коэффициент вариации V.