Oпределение аптв (ачтв).

Принцип метода: Определяется время свертывания плазмы крови в условиях стандартизированной контактной (каолином) и фосфолипидной (кефалином) активации процесса в присутствии ионов кальция.

Реактивы:

1. Кефалин (лиофильно высушенный фосфолипидный компонент) -  2 флакона;

2. Каолин (концентрированная суспензия 40:1 в дистиллированной воде),  1,0 мл - 1 флакон;

3. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М),  10 мл  - 1 флакон;

4. Кальция хлорид (концентрированный 20:1 раствор, 0,5 М) - 10 мл - 1 флакон..

Оборудование:

• коагулометр (при его отсутствии секундомер, термобаня +37 С);

• пипетки на 0,1мл и 5,0 мл;

• пробирки стеклянные;

• вода дистиллированная;

• цилиндр мерный вместимостью 200мл;

• перчатки резиновые хирургические.

Бедная тромбоцитами плазма получается для определения АТПВ (АЧТВ) и каолинового времени бедной тромбоцитами плазмы. Богатая тромбоцитами плазма может быть использована для определения каолинового времени в такой плазме (или АВР).

Приготовление реагентов:

1. Разведение кефалина

Во флакон с кефалином внести 2,0 мл д. воды и растворить содержимое при комнатной температуре, перед использованием должен быть выдержан 60 мин;

2. Приготовление АПТВ реагента.

Концентрированный буфер трис-НСI и концентрированную суспензию каолина количественно перенести из флаконов в мерный цилиндр и общий объем довести дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочую суспензию каолина.

Для приготовления АПТВ-реагента смешать в пробирке 0,1 мл раствора кефалина с 2,0 мл рабочей суспензии каолина. Полученный АПТВ реагент можно использовать не более 1 дня.

3. Приготовление рабочего раствора хлорида кальция.

В день исследования, в соответствии с потребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести д. водой в 20 раз (1 объем конц. Раствора + 19 объемов воды).

Ход определения:

1. Коагулометрический вариант:

В кювету внести 0,1 мл исследуемой плазмы и прогреть 1 минуту. Затем добавить 0,1 мл АПТВ реагента, имеющего комнатную температуру. Через 3 минуты к смеси добавить 0,1 мл прогретого хлорида кальция и зарегистрировать время свертывания.

Норма: 32-42секунды.

2. Мануальный вариант.

К 0,1 мл исследуемой плазмы, взятой в пробирку, добавить 0,1 мл АПТВ реагента и поместить пробирку на водяную баню при 37 С. Через 3 минуты к смеси добавить 0,1 мл прогретого хлорида кальция и включить секундомер. Достать пробирку и отметить время свертывания при периодическом покачивании.

Норма: 28-38 секунд.

Клинико-диагностическое значение.

Определение АПТВ используется для выявления гипер- и гипокоагуляционного сдвига, контроля за гепаринотерапией при тромбозах, тромбоэмболиях и ДВС-синдромах различной этиологии, для диагностики гемофилии (дефицит факторов VIII, IX, XI), болезни Виллебранда.

Оснащение лаборатории.

ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЙ ПАРК ОБОРУДОВАНИЯ

Наименование ЛО(Тип, Модель)	Завод- изготовитель, фирма, страна	Год ввода	Кол-во
Микроцентрифуга «Microfuge 22R»	США, «Бекман Культер Инк.»	2010	1
Центрифуга лабораторная «Allegra Х-22R»	США, «Бекман Культер Инк.»	2010	2
Центрифуга универсальная «Allegra Х-12R»	США, «Бекман Культер Инк.»	2010	1
Лабораторная центрифуга LMC-3000	Латвия, ЗАО «Вектор-Бест»	2010	1
Термостат медицинский TW-2.02.	Латвия, «Elmi Ltd.»	2010	1
Счетчик лабораторный «С-5»	Россия, «Стимул Плюс»	2010	8
Ротатор «Мulti RS-60»	Латвия, «BioSan»	2010	1
Шейкер мини рокер «MR-1»	Латвия, «BioSan»	2010	1
Секундомер механический "Агат"	Россия, «Златоустовский часовой завод»	2010	1
Ультразвуковая мойка «FinnSonik m08»	Финляндия, « FinnSonic»	2010	1
Суховоздушный шкаф-стерилизатор «ЕD-53»	Германия, «Биндер ГмбХ»	2010	1
Посудомоечная машина «Deko 25»	Финляндия, «Франке Финланд Ою»	2010	1
Система водоподготовки «Millipore Еlix 35»	Франция, «Millipore S.A.S.»	2010	1
Морозильник «SANYO MDF-U333»	Япония, «SANYO Electric C.»	2010	1
Шкаф холодильный «Polair ШХ-0,5 ДС»	Россия, «Завод Совиталпродмаш»	2010	6
Облучатель рециркулятор закрытого типа - «Дезар-3»	Россия, «Кронт-М»	2010	3
Облучатель рециркулятор закрытого типа - « Дезар4»	Россия, «Кронт-М»	2010	1
Термометр сельскохозяйственный «ТС-7-М-1»	Украина, «Стеклоприбор»	2010	7
Гигрометр психометрический «ВИТ-2»	Украина, «Стеклоприбор»	2010	5
Пылесос «LG V-C20261HQ»	Китай, «LG»	2011	1
Кондиционер «Dantex RK-12SDM2» (3.2кВт)	«нет свед.»	2011	1
Кондиционер «Dantex RK-24SDM3» (7.0кВт)	«нет свед.»	2011	1
Шкаф вытяжной	«БиоМебель»	2010	2
Дозатор	«BIOHIT OYJ», Финляндия	2010	8

ОСНОВНОЙ ПАРК ОБОРУДОВАНИЯ

Наименование ЛО (Тип, Модель)	Завод- изготовитель, фирма, страна	Год ввода	Кол-во
1	2	3	4
Автоматический биохимический анализатор «AU 480»	США, «Бекман Культер Инк.»	2011	1
Анализатор гемостаза «Sysmix СА 1500»	Япония, «Sysmix Corporation»	2011	1
Автоматический иммунохимический анализатор «Access 2»	США, «Бекман Культер Инк.»	2011	1
Автоматический иммунохимический анализатор «Architect I1000sr»	США, « Эббот Лэбораториз.»	2011	1
Автоматический гематологический анализатор «LH 500»	США, «Бекман Культер Инк.»	2011	1
Автоматический гематологический анализатор«МЕК - 6410»	Япония, «Nihon Kohden Corporation»	2010	1
Автоматический гематологический анализатор «Мicros 60»	Франция, «ABX Diagnostics»	2010	1
Анализатор биохимический «Accutrend Plus»	ФРГ, «Рош Диагностика ГмбХ.»	2011	2

Группа _____________

Ф.И.О. ___________________________________

№	Виды работ и навыки	Количество
1.	Знакомство с лабораторией, персоналом, аппаратурой, прохождение «Техники безопасноти»
2.	Приготовление реактивов для калибровки аппаратов.
3.	Работа с биохимическим анализатором.
4.	Определение Fib, D-Dimer, гликолизированный гемоглобин.
5.	Иммунологические исследования плазмы крови на аппарате.
6.	Микрореакция на силифилис, определение гепатитов А и В, ВИЧ на аппарате.
7.	Калибровка аппарата для биохимического анализа плазмы крови.
8.	Определение протромбинового времени.
9.	Определение АПТВ (АЧТВ).
10.	Определение тромбинового времени.
11.	Работа с системой (ЛИС), регистрация результатов.	Очень много
12.	Работа с центрифугой	Очень много

Итоговая оценка производственной практики:

___________________________

«______»___________________2013г.

Подпись непосредственного

руководителя практики ___________ _______________________

(подпись) (Ф.И.О.)

Подпись методического

руководителя ___________ ______________________

(подпись) (Ф.И.О)