2.Ученые в описании методов биохимической диагностики

Основы титриметрического метода были заложены еще в середине XVIII столетия. В 1726 г. К. Ж. Жоффруа осуществил нейтрализацию кислот в аналитических целях.

К 1750 г. в качестве титранта стали использовать раствор с известной концентрацией, а индикатором служил фиалковый экстракт. В 1795 г. был предложен метод определения гипохлорита.

Ж. Л. Гей-Люссак позднее предложил индиго в качестве индикатора для окислительно-восстановительного титрования. Он ввел и термин “титрование”.

Классические методы иммунохимического анализа, описанные ещё в конце XIX веке в работах таких выдающихся учёных как Эрлих, Борде, Ландштейнера.

В 1809 году Рейс и Страхов открыли явления электрофореза и электроосмоса.

Электрофорез в крахмальном геле предложен О. Смитисом.

Электрофорез в полиакриламидном (ПААГ) геле предложен Л.Орнстейном и Д. Дэвисом.

Явление оптической активности известно с начала XIX века. Именно с открытия оптической активности (Ж. Био, 1815) начала развиваться стереохимия. В ее изучение главный вклад внесли французские ученые Д.Араго, Ж.Био, Л.Пастер, Э.Коттон, О.Френель.

Практические попытки количественного определения мутности относят к 1900 году, когда Уипп и Джексон разрабртали стандарт суспензии, содержащей 100 миллионных долей кизельгура (диатомитовой земли) в дистиллированной воде. Разбавление этой суспензии позволило создать так называемую «кремнеземную» шкалу мунтности на основе ряда стандартных суспензий для калибровки турбидиметров того времени. Джексон воспользовался шкалой для работы с существовавшим тогда прибором диафанометром и создал то, что известно под названием «свечной турбидиметр Джексона».

Хроматографический метод анализа был впервые применён русским учёным-ботаником Михаилом Семеновичем Цветом в 1900 году. Он использовал колонку, заполненную карбонатом кальция для разделения пигментов растительного происхождения.

В 1952 году Дж. Мартину и Р. Синджу была присуждена Нобелевская премия по химии за создание метода распределительной хроматографии.

3.Колориметрические методы в определении бжу

Колориметрия применяет измерение плотности окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества. При этом специальный прибор – колориметр измеряет плотность окраски раствора.

Колориметрические методы определения общего белка

Биуретовый метод. Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO4 и цитрата. Оптическую плотность раствора определяют при 540-560 нм.

Метод Лоури. В щелочной среде ионы Cu⁺² образуют комплекс с пептидными связями, переходя в Cu⁺. Одновалентные ионы меди реагируют с реактивом Фолина, образуя нестабильный продукт, переходящий в молибденовую синь, с максимумом адсорбции при 750 нм. Увеличение адсорбции при 750 нм пропорционально концентрации белка.

Метод Бредфорда. Метод основан на реакции красителя кумасси с аргинином и гидрофобными аминокислотными остатками. Связанная форма имеет голубую окраску с максимумом поглощения при 595 нм

Колориметрические методы определения мочевины

Ксантгидриловый метод. Гетероциклический спирт ксантгидрол вступает в реакцию с мочевиной и образует нерастворимую диксантилмочевину, которую в дальнейшем определяют гравиметрически, нефелометрически, колориметрически или титрометрически. Методы точны, но трудоёмки

Гипохлоритный метод состоящий в появлении характерной окраски при взаимодействии мочевины с гипохлоритом натрия и фенолом, практически не применяется из-за разного оттенка опытных и контрольных проб, частого появления мути при добавлении HCl.

Колориметрические методы определения креатинина

Метод Поппера, основанный на реакции Яффе. В щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яффе — образование таутомера пикрата креатинина), которую измеряют фотометрически при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.

Колориметрические методы определения глюкозы в крови

Метод Сомоджи. Используется способность глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в закись меди, превращающей, в свою очередь, арсено-молибденовую кислоту в молибденовую лазурь.

Метод Фолина-Ву. Состоит в определении окраски молибдена синего, который образуется в результате восстановления тартрата меди в окись меди. Последняя, взаимодействуя с молибдотустенгоновой кислотой, дает цветную реакцию.

Метод Крезелиуса – Зейферта. Основан на восстановлении пикриновой кислоты в пикраминовую с последующим ее колориметрированием. Метод быстр, но не очень точен. Ошибка может превышать 10-20%. В связи с этим указанный метод имеет ориентировочное значение;

Анилиновый метод. Основан на взаимодействии глюкозы с анилином с образование окрашенного продукта.

Колориметрические методы определения глюкозы в моче

Метод Альтгаузена. Основан на осмолении редуцирующих сахаров при кипячении со щелочью. К 4 мл мочи приливают 1 мл 10%-ной щелочи. Кипятят в течение 1 мин. Через 10 мин после кипячения цвет жидкости сравнивают с цветной шкалой. На шкале соответственно каждой окрашенной полоске обозначено процентное содержание сахара.

Колориметрические методы определения ТГ

Метод определения содержания триглицеридов в сыворотке крови с ацетилацетон. Триглицериды экстрагируются из сыворотки крови. Освобожденный в результате щелочного гидролиза глицерин окисляют до формальдегида с помощью метаперйодата натрия. Образовавшийся формальдегид образует с ацетилацетоном в слабом уксусном растворе 3,5-диацетил-1,4-дигидролютидин, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию триглицеридов.

Колориметрические методы определения ХС

Реакция Биоля-Крофта. Основана на взаимодействии холестерина, при использовании персульфата калия, с уксусной и серной кислоты, в результате которого появляется красное окрашивание.

Реакция Ригли. Основана на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.

Реакция Чугаева. Основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком, в результате появляется красное окрашивание.

Колориметрические методы определения ФЛ

Цитохимическое определение фосфолипидов в лейкоцитах суданом черным Б. Выявление фосфолипидов основано на применении липофильных красителей, растворяющихся и избирательно концентрирующихся во внутриклеточных липидах.

Метод определения суммарного азота. Метод основан на способности фосфора, соединяясь с молибденом аммония, образовывать фосфорно-молибденовую кислоту, которая восстанавливается амидоловым реагентом и дает голубое окрашивание.

Колориметрический метод определения ЛПВП

Ферментативный метод. антитела к бета-липопротеинам человека, содержащиеся в реактиве 1, образуют иммунные комплексы со всеми липопротеидами, за исключением ХС-ЛПВП.