3. Основные методы исследования фагоцитарного механизма иммунного ответа применяемые в клинике

Для оценки фагоцитарной системы чаще всего используется определение: - -

*фагоцитарного индекса нейтрофилов и моноцитов;

* бактерицидности нейтрофилов и моноцитов;

*образования активных форм кислорода и азота;

* хемотаксиса;

* экспрессии на лейкоцитах молекул адгезии.

Поэтому именно на нейтрофилах оценивают поглотительную и метаболическую функциональную активность фагоцитов крови, ставя два нижеприведённых теста: НСТ-тест и тест фагоцитоза с латексом. Тесты спонтанного и стимулированного фагоцитоза проводятся с использованием частиц латекса. Фагоцитоз с латексом основан на поглощении частиц латекса нейтрофилами (адгезия, захват и полное поглощение). При проведении спонтанного теста лейкоциты, выделенные из периферической крови, смешивают с суспензией частиц латекса; при проведении теста индуцированного фагоцитоза к полученной смеси добавляют раствор пирогенала. После инкубирования при 37° С в течение 30 минут готовят мазки, а затем в фиксированных и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках подсчитывают процент нейтрофилов; поглотивших латекс.

Тест восстановления нитросинего тетразолия - HCT'mecm основан на восстановлении лейкоцитами крови с помощью активных форм кислорода нитросинего тетразолия в диформазан. При этом используется способность ферментов, опосредующих Киллинг бактерий в фагоцитах, изменять окраску нитросинего тетразолия от изначально желтой до сине-фиолетовой (внутркядерные включения - глыбки диформазана). Постановка реакции. На обезжиренное предметное стекло наносят 0,02 мл 0,9% раствора хлорида натрия, 0,02мл нейтрофильной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ (нитросинего тетразолия). В качестве нагрузки используют коммерческий липополисахарид грамотрицательных бактерий Е.соli или раствор пирогенала в разведении 1:IO. На другое обезжирешое стекло наносят 0,02 мл ЛПС, 0,02 мл нейтрофилной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ. Помещают во влажную камеру на 30 мин. готовят мазки, высушивают,фиксируют. Окрашивают 0,1% раствором нейтрального красного. Учитывают нейтрофилы, высчитывая % лейкоцитов с гарнулами восттановленного НСТ(диформазан синего цвета)

Неспецифическая клеточная защита организма осуществляется лейкоцитами, которые способны к фагоцитозу. Фагоцитоз - это процесс узнавания, захвата и поглощения разных чужеродных структур (разрушенных клеток, бактерий, комплексов антиген-антитело и др.). Клетки, осуществляющие фагоцитоз (нейтрофилы, моноциты, макрофаги), называются общим термином - фагоциты. Фагоциты активно передвигаются и содержат большое количество гранул с различными биологически активными веществами.

Фгоцитарную активность лейкоцитов

Метод

Из крови определенным способом получают лейкоцитарную взвесь, которую смешивают с точным количеством лейкоцитов (1млрд микробов в 1 мл). Через 30 и 120 мин готовят мазки из этой смеси и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом просматривают около 200 клеток и определяют количество фагоцитов, которые поглотили бактерии, интенсивность их захвата и уничтожения. 1. Фагоцитарный индекс - это процент фагоцитов, поглотивших бактерии через 30 и 120 мин, к общему количеству просмотренных клеток. 2. Фагоцитарный показатель - среднее число бактерий, находящихся в фагоците через 30 и 120 мин (производят математическое деление общего числа поглощенных фагоцитами бактерий на фагоцитарный индекс) 3. Индекс завершенности фагоцитоза - рассчитывается делением числа убитых бактерий в фагоцитах на общее число поглощенных бактерий и умножением на 100