Vш. Методика микробиологического исследования полости рта

Для изучения качественного и количественного состава микрофлоры полости рта исследуется зубной налет, слизистые оболочки щеки, десны, неба, поверхность языка и ротовая жидкость.

Зубной налет для исследования собирается стерильным экскаватором. Полученный материал взвешивается на аналитических весах с последующим разведением от 1:100 до 1:1000 и посевом на питательные среды.

Забор материала со слизистых оболочек и поверхности языка проводится стерильным ватным тампоном с площади 1 см.² и последующим высевом на питательные среды.

Ротовая жидкость собирается в стерильную пробирку, исследуется 0,1 мл.

Для изучения орального микробиоценоза применяются следующие питательные среды: 5% кровяной агар для подсчета общего микробного обсеменения, желточно-солевой агар - для стафилококков, сахарный бульон и "Mitis Salivarius Agar” - для стрептококков, растительно -молочную среду для лактобактерий, среду Сабуро с полимексином - для грибов рода Candida, среду Вильсона - Блера для анаэробов, среду Эндо - для энтеробактерий.

Посевы инкубируются в термостате 24 часа, среда Сабуро около 5 дней.

Идентификация выделенных штаммов микроорганизмов осуществляют на основании морфологических, культуральных и биохимических признаков в соответствии с определителем бактерий Д. Берги (1988).

Количественный учет плотности популяций различных экологических групп производится путем подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) в одном грамме зубного налета, 1 мл. ротовой жидкости на 1 см.² поверхности языка и слизистых оболочек щеки, десны и неба.

1. Идентификация представителей нормофлоры полости рта

ЛАКТОБАКТЕРИИ. Род Lactobacillus Палочковидные бактерии, неподвижные, спор не образуют, грамположительны, факультативные анаэробы, хемоорганотрофы.

На кровяном агаре образуют серые колонии, или мелкие, окруженные зоной альфа - гемолиза колонии. Биохимические свойства: ферментируют глюкозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, сорбит с образованием молочной кислоты. Нитраты не восстанавливают, желатин не разжижает, индол и сероводород на образует.

В полости рта: L. casei, L. acidophilus, L. yermentum, L. salivarius.

СТРЕПТОКОККИ. Семейство Streptococcaceae, род Streptococcus.

Грамположительные кокки, располагающиеся в мазках короткими или длинными цепочками.

По виду гемолиза на 5% кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы:

1. Гемолитические стрептококки, вызывающие полный лизис эритроцитов с прозрачной зоной гемолиза. Колонии могут быть:

а) мукоидные, крупные, блестящие в диаметре 1,5 -2,5мм., напоминающие капельки росы. Данный вид колоний характерен для капсульных штаммов S. pyogenus.

б) шероховатые, до 2,5 мм. в диаметре серо-белого цвета с приподнятым центром. Этот вид колоний характерен для штаммов, содержащих М - протеин.

в) гладкие, мелкие, до 1,5 мм. в диаметре сферической формы, блестящие.

2. Зеленящие стрептококки - образуют на 55 кровяном агаре полупрозрачную, зеленоватого цвета зону гемолиза. Колонии мелкие, до 1,5 мм. в диаметре, серовато-зеленоватого цвета с гладкой, либо шероховатой

поверхностью. Этот тип колоний характерен для S. salivarius, S. sanguis.

3. Негемолитические стрептококки - не реагируют с эритроцитами, не вызывают гемолиза.

После микроскопического изучения, производят пересев колоний в питательный бульон с сывороткой (10%) или глюкозой (0,2%). Инкубируют при температуре 37 °С , 24 часа.

На следующий день учитывают характер роста стрептококков в жидкой питательной среде, делают мазки, окрашивают по Граму. Характер роста может быть различным:

а) придонно-пристеночный рост с образованием мелко-крошковатого осадка и сохранением прозрачности среды. Микроскопически выявляются длинные цепочки грамположительных кокков.

б) придонный рост в виде пушистого, рыхлого осадка с сохранением прозрачности среды или помутнением надосадочного слоя. Микроскопически выявляются цепочки грамположительных кокков, с уменьшением длины цепочек возрастает наклонность к диффузному росту.

в) диффузный рост с интенсивным помутнением бульона и образованием гомогенного осадка. Идентификацию культур гемолитического стрептококка осуществляют на третий день исследования по методу Ленсфильда. Принцип метода: образование видимого преципитата в результате взаимодействия группоспецифического полисахарида "С" с соответствующими ему антителами группоспецифической антистрептококковой сыворотки.