2. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ)

Микрометод Панченкова

Принцип метода: при стоянии стабилизированной цитратом натрия крови эритроциты оседают с различной скоростью в зависимости от физико-химических свойств крови. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) выражается в миллиметрах за 1 час.

Оборудование и реактивы:

1. Аппарат Панченкова, состоящий из штатива с капиллярами шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деления от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 мм имеется буква К (кровь), а на середине капилляра, около метки 50 мм – буква Р (реактив).

2. Агглютационные (видалевские пробирки).

3. 5% свежеприготовленный раствор лимоннокислого натрия.

4. Вата.

5. Спирт

6. Копья- скарификаторы.

Ход исследования. В капилляр Панченкова набирают 5 % раствор лимоннокислого натрия до метки “Р” – 50 мм и выдувают его в видалевскую пробирку. Затем этим же капилляром из укола пальца, держа капилляр горизонтально, набирают два раза кровь до метки “К” – 0 мм и выпускают ее в пробирку с лимоннокислым натрием. Хорошо перемешивают. Этим же капилляром набирают цитратную кровь до метки «К» и ставят строго вертикально в штатив. Полученное соотношение объемов крови и лиммоннокислого натрия равно 1:4. Через час отмечают по делениям на капилляре число миллиметров освободившегося от эритроцитов столбика плазмы.

Интерпретация полученных данных. В норме СОЭ равна для мужчин 1-10 мм/час, для женщин – 2-15 мм/час. Она зависит от количества эритроцитов, их диаметра и объема (уменьшение ускоряет СОЭ, увеличение замедляет), вязкости крови, содержания в плазме белковых фракций, мукополисахаридов, желчных кислот и пигментов.

СОЭ не служит самостоятельным диагностическим показателем, специфическим для какого-либо определенного заболевания, однако ее увеличение, как правило, указывает на появление патологического процесса в организме инфекционно-воспалительного характера (пневмония, туберкулез, пиелонефрит и т.п.), инфекционно-аллергического (ревматизм), опухолевого (саркома, гемобластозы, рак) и анемического характера, при диффузных болезнях соединительной ткани. Замедление СОЭ наблюдается при полицетемии (увеличение количества форменных элементов крови) и значительном сгущении крови.

3. Определение концентрации гемоглобина

3.1. Колориметрический метод Сали

Принцип метода: гемоглобин крови смешивают с соляной кислотой, превращая его в солянокислый гематин и сравнивают цвет полученного раствора с имеющимся в гемометре Сали стандартом.

Оборудование и реактивы:

1. Гемометр Сали (визуальный гемоглобинометр).

2. Пипетка от гемометра Сали.

3. 0,1N HCl.

4. Дистиллированная вода.

5. Пипетка

6. Стеклянная палочка

7. Копья-скарификаторы.

Гемометр Сали представляет собой простейший колориметр, имеет пластмассовый корпус, задняя стенка которого сделана из матового стекла, рассеивающего свет. В корпус вмонтированы три небольшие стеклянные пробирки. Две боковые, запаянные с обоих концов, содержат стандартный раствор хлорида гематина в глицерине. Цвет жидкости в стандартных пробирках соответствует цвету 2 % раствора хлорида гематина. На всех трех пробирках нанесены две круговые метки: нижняя соответствует вместимости 0,2 мл, верхняя – 2 мл. Пробирки установлены на горизонтальной пластине и при равенстве их диаметров все круговые метки должны находиться на одном уровне. Средняя пробирка гемометра имеет 2 шкалы. Одна с делениями от 0 до 23 служит для определения гемоглобина в грамм-процентах; другая шкала с делениями от 0 до 140 показывает единицы гемоглобина (процент гемоглобина). К гемометру прилагается капилляр, имеющий одну отметку 0,02 мл (капилляр Сали); резиновая трубочка со стеклянным наконечником, 2 тонкие стеклянные палочки, глазная пипетка.

Ход исследования: В градуированную пробирку гемометра, находящуюся в среднем прорезе, наливают децинормальный раствор HCl до нижней круговой метки 0,2 мл (2 г %) и вставляют ее в гемометр Сали. Капилляром Сали вносят в эту пробирку 0,02 мл крови, причем кровь выдувают осторожно, чтобы не допустить образования пузырей, на дно пробирки. Не вынимая капилляр из пробирки, его 2 –3 раза прополаскивают надосадочным прозрачным раствором 0,1 N HCl, потом извлекают из жидкости, прикасаясь его кончиком к стенкам пробирки, выдувают остатки жидкости и достают капилляр из пробирки. Кровь тщательно перемешивают с соляной кислотой и оставляют на 5 минут. За это время эритроциты гемолизируются и гемоглобин превращается в хлорид гематина бурого цвета. По истечении указанного времени к испытуемой жидкости по каплям добавляют дистилированную воду. Содержимое пробирки размешивают тонкой стеклянной палочкой. Разведение продолжают до полного совпадения цвета жидкости в градуированной пробирке с цветом стандартов. На шкале пробирки находят деление, соответствующее уровню жидкости по нижнему мениску Цифра деления шкалы обозначает количество гемоглобина в процентах. При концентрации гемоглобина менее 6,7 г% можно брать два капилляра Сали крови с тем же количеством HCl (т.е. HCl наливается до нижней круговой метки) полученный результат делят на 2. Количество гемоглобина при оформлении анализа записывают в г/л, для этого полученный результат умножают на 10.

Оценка полученных данных. В норме концентрация в крови гемоглобина составляет у женщин 120 – 140 г/л (12 – 14 г%), у мужчин – 130 – 160 г/л (13 – 16 г%).