Мікровизначення білку

Мета роботи: визначити концентрацію білку в досліджуваному матеріалі за допомогою фотоелектроколориметру.

Білки (поліпептиди) в лужному розчині в присутності сульфату міді (ІІ) утворюють комплексні сполуки міді, що забарвлені в синьо-фіолетовий колір, інтенсивність якого залежить від числа пептидних зв’язків у молекулі білка.

Прибори, посуд, реактиви

Стандартні розчини альбуміну, що містить 1 мг у 1 см³, біуретовий реактив: 17,3 г цитрату натрію і 10 г Nа₂СО₃ розчиняють при підігріванні в невеликій кількості води; у розчин додають 1,73 г СuSО₄, розчиненого в 10 см³ Н2О и доводять водою до 100 см³; NаОН - 6% розчин.

Калібрувальна крива.

Порядок виконання роботи

До 2 см³ розчину, що містить 0,1-2 мг білка, додають 2 см³ 6% розчину NаОН і 0,2 см³ реактиву Бенедикта. Розчин добре перемішують і через 15 хв фотометрирують при довжині хвилі 330 нм. Після чого за калібрувальною кривою визначають концентрацію білка в пробі.

Питання для самоперевірки

1. Яким методом визначають концентрацію білка в пробі?

2. Які реактиви використовують при визначенні білка?

Лабораторна робота № 7

Мітотичний поділ клітини

Мета роботи: вивчити процес мітозу на прикладі тканин цибулі.

Прилади, посуд, реактиви

Корінець цибулі (Allіum satіvum), подовжній зріз у зоні росту, постійний мікропрепарат, пофарбований гематоксиліном Гейденгайна, мікроскоп, велике збільшення

Порядок виконання роботи

На препараті видно клітини тканини цибулі. Оболонка клітин навіть при сильному збільшенні виступає лише у виді тонких ніжних ліній. Ядро клітини завдяки фарбуванню гематоксиліном (спеціальна ядерна фарба) добре помітно. Здебільшого клітини знаходяться в стадії інтеркінезу. На цій стадії ядро виразне оформлено, видна його оболонка і темне ядерце, яке інтенсивно зафарбувалося. Місцями можна розрізнити клітини зі змінами в ядрі в процесі мітотичного розподілу. Пересуваючи препарат, пошукайте різні стадії мітозу, замалюйте них, розташувавши в тій послідовності, що має місце при непрямому (мітотичному) розподілі клітини, керуючись приведеним нижче описом фаз і стадій розподілу.

Профаза. Ядро трохи збільшене в розмірах. Оболонка ядра і ядерце поступове зникають. Зерна хроматину інтенсивно офарблюються в чорний колір. З'єднуючись один з одним, зерна хроматину утворюють спочатку чіткоподібну, потім гладку хроматиновую нитку, що розташовується в клітині у виді клубка (стадія материнського клубка).

Метафаза. Хроматинова нитка розпалася на окремі шматочки - хромосоми, що поступово переміщаються на екватор клітини, оточуючи ахроматинове веретено (стадія материнської зірки). На препаратах цю стадію розподілу можна впізнати за хромосомами у самому тілі клітини, які лежать безладно; оболонка ядра вже зникла. Зустріти на препараті більш правильне розташування хромосом на екваторі (стадія екваторіальної пластинки) важко.

Анафаза. Розглянути на зрізі подовжнє розщеплення хромосом, що відбуває в цій фазі, теж важко. Легше знайти хромосоми, які вже розщепилися, та утворили так звані дочірні зірки (стадія подвійної або дочірньої зірки).

Телофаза — в клітині видно два дочірні ядра, які ще не повністю оформилися.

Замалювати кожну з фаз в робочому зошиті.

Питання для самоперевірки

1. Що таке мітоз?

2. Охарактеризуйте основні фази мітозу.

Лабораторна робота № 8