7.2 Задание к лабораторной работе

1 Провести микробиологический контроль дрожжей.

1.1 Приготовить препарат «раздавленная капля» из дрожжевой суспензии. Промикоскопировать с объективом х40. определить форму дрожжевых клеток, определить количество почкующихся клеток, зарисовать.

При определении формы дрожжевых клеток и количества почкующихся клеток чаще всего используют препарат «раздавленная капля». Микроскопируют с объективом х40. При необходимости определения наличия бактериальной инфекции препарат «раздавленная капля» микроскопируют с объективом х90 (МИ), при этом препарат должен быть очень тонким. Или готовят мазок, проводят простое окрашивание и микроскопируют с объективом х90 (МИ).

Определение количества почкующихся клеток

Почкующимися клетками принято считать те, у которых дочерние клетки меньше материнских. При равных размерах материнской и дочерней клеток их считают двумя самостоятельными клетками.

В препарате дрожжевой суспензии в 5 полях зрения подсчитывают общее количество дрожжевых клеток и количество почкующихся. Процентное содержание почкующихся клеток определяют по формуле:

Х=А∙100/Б,

где А- число почкующихся клеток в 5 полях зрения;

Б – общее количество клеток в 5 полях зрения.

1.2 Приготовить препарат для выявления мертвых дрожжевых клеток. Промикроскопировать, зарисовать. Оценить процентное содержание мертвых клеток.

Определение количества мертвых дрожжевых клеток

Метод основан на том, что мертвые и ослабленные дрожжевые клетки способны пропускать через оболочку краситель – метиленовую синь. На предметное стекло с каплей дрожжевой суспензии наносят каплю раствора метиленовой сини. Краем покровного стекла смешивают капли и затем накрывают, оттягивая избыток жидкости фильтровальной бумагой и через 1-2 минуты препарат микроскопируют с объективом х40.

Мертвые дрожжевые клетки окрашиваются в сине-голубой цвет, живые – остаются неокрашенными. Подсчитывают количество окрашенных и неокрашенных дрожжевых клеток в 5 полях зрения и процентное содержание мертвых клеток.

В производственных дрожжах мертвых клеток должно быть не более 1 %. В активных сухих дрожжах – не более 30 %.

1.3 Приготовить препарат для выявления гликогена в клетках. Промикроскопировать, зарисовать. Определить степень упитанности дрожжей.

Определение гликогена

Гликоген – полисахарид, который является запасным питательным веществом и откладывается в клетке в виде гранул. Он не является постоянным компонентом клетки, образуется в зависимости от условий культивирования, возраста культуры и может использоваться в метаболизме клетки.

Метод определения основан на окраске гликогена йодом. Окрашивание гликогена происходит в кислой среде, поэтому перед выявлением гликогена среду подкисляют, либо на предметное стекло вместо воды наносят 0,5 % раствор соляной кислоты и в ней эмульгируют исследуемую культуру.

Для определения на предметное стекло наносят небольшую каплю микробной суспензии, добавляют каплю концентрированного раствора Люголя и выдерживают 2-3 минуты. Далее каплю накрывают покровным стеклом, удаляют избыток жидкости и микроскопируют с объективом х40 или х90 (МИ).

Клетки дрожжей окрашиваются в светло-желтый цвет, а гранулы гликогена – в коричневый. Подсчитывают количество клеток, содержащих гликоген в 5 полях зрения, и вычисляют процентное содержание клеток с гликогеном.

При хорошей упитанности дрожжи содержат не менее 50 % клеток с гликогеном, при степени упитанности выше средней – 35-50 %, при средней – 20-35 %, при слабой – менее 20 %.