Диагностика хеликобактерной инфекции

Цитологическое исследование. Для цитологического исследования используют мазки-отпечатки биоптатов слизистой оболочки желудка (антрального отдела) при гастроскопии. Биоптат необходимо брать из участков с наибольшей гиперемией и отеком, но не из дна эрозий или язв. Затем мазки высушиваются и окрашиваются по методу Романовкого-Гимзы. Хеликобактерии располагаются в слизи, имеют спиралевидную, изогнутую форму, бывают S-образной формы.

Выделяют три степени обсемененности хеликобактериями:

• слабая (+) – до 20 микробных тел в поле зрения;

• средняя (++) – до 50 микробных тел в поле зрения;

• высокая (+++) – более 50 микробных тел в поле зрения.

Уреазный тест. Хеликобактерии выделяют фермент уреазу, под влиянием которой мочевина, содержащаяся в желудке, разлагается с выделением аммония. Образующийся в результате реакции ион аммония значительно увеличивает рН среды, что можно констатировать с помощью индикатора, а, значит, и отметить визуально по изменению ее окраски.

При наличии в биоптате хеликобактерий среда приобретает малиновую окраску. Время появления малиновой окраски косвенно указывает на количество хеликобактерий.

(+) – незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток);

(++) – умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2 ч);

(+++) – значительная инфицированность (малиновое окрашивание появляется в течение первого часа);

(-) – результат отрицательный (малиновое окрашивание наступает позже, чем через сутки).

С-уреазный дыхательный тест. Метод основан на том, что принятая внутрь мочевина, меченная ¹³С, под влиянием уреазы хеликобактерий разлагается с образованием аммиака и СО₂. В выдыхаемом СО₂ определяется содержание ¹³С и по его уровню делается заключение об инфицированности хеликобактериями.

Исследование проводится натощак. Вначале в пластиковые пробирки с интервалом в 1 минуту берутся две фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Затем больной принимает внутрь легкий пробный завтрак (молоко, сок) и тестовый субстрат (водный раствор мочевины, меченной ¹³С). Затем в течение 1ч с интервалами 15 минут берут 4 пробы выдыхаемого воздуха.

Содержание ¹³С в выдыхаемом воздухе определяется с помощью масс-спекрометра. В зависимости от процентного содержания изотопа ¹³С в выдыхаемом воздухе различают 4 степени инфицированности хеликобактериями:

• менее 3,5% – легкая;

• 3,5 – 6,4% – средняя;

• 6,5 – 9,4% – тяжелая;

• Более 9,5% – крайне тяжелая.

В норме содержание ¹³С в выдыхаемом воздухе не превышает 1% от общего количества СО₂.

Метод чрезвычайно дорог и пока мало доступен.

Микробиологический метод. Посевы для определения хеликобактерий производят с биоптатов слизистой оболочки желудка. Инкубация посевов осуществляется в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода не более 5%. Для создания такой среды применяются специальные газогенераторные химические пакеты. Для роста хеликобактерий используются специальные кровяные питательные среды. Через 3-5 суток на питательной среде появляются мелкие, круглые, прозрачные, росинчатые колонии хеликобактерий. Затем производится идентификация выделенной культуры.

Гистологический метод. Материалом служат биоптаты слизистой оболочки желудка в местах наиболее выраженного воспаления.

Готовятся тонкие срезы и препараты окрашиваются гематоксилином и эозином или по методу Романовского-Гимзы. Хеликобактерии выявляются в виде спиралеобразных, S-образных бактерий.

В последние годы появились наиболее точные методы идентификации хеликобактерий. К ним относятся иммунохимический метод с моноклональными антителами. В настоящее время существуют коммерческие наборы, позволяющие использовать обычный биопсийный материал, фиксированный в формалине и залитый в парафин. Моноклональные антитела, входящие в эти наборы, работают при разведении 1:200000 и избирательно окрашивают только хеликобактерии.

В последнее время стали использоваться методы выявления хеликобактерий с использованием гибридизации ДНК в обычных парафиновых срезах.