Отбор проб

Отбор клеток микроорганизмов, выращенных на плотной среде в пробирке, осуществляют следующим образом. Пробирку с культурой берут в левую руку так, чтобы поверхность питательной среды с налетом микроорганизмов была обращена кверху и хорошо видна. Пробирку держат в горизонтальном или несколько наклонном положении. В правую руку берут петлю так, как держат карандаш, и прокаливают в пламени горелки. Затем, не выпуская петли, мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижимают ватную пробку к ладони, вынимают ее из пробирки и держат так во время последующих манипуляций. Края открытой пробирки с культурой микроорганизмов обжигают в пламени горелки и после этого вводят в пробирку стерильную петлю. Взяв небольшое количество микробной массы с поверхности субстрата, вынимают петлю из пробирки, следя за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок или краев пробирки. Горлышко пробирки снова обжигают в пламени горелки, затем обжигают ватную пробку и закрывают ею пробирку. Если конец ватной пробки загорится, то не следует бросать пробку. Ее нужно быстро ввести в пробирку, где вата сама потухнет.

Если в момент пересева ватная пробка упадет на пол или на стол, то не следует снова вставлять ее в пробирку. Нужно взять новую стерильную пробку и начать всю операцию заново. Закрытую ватной пробкой пробирку с культурой ставят в штатив, а извлеченный материал используют для приготовления препарата или для пересева культуры в свежую среду.

Если культуру пересевают на скошенную агаризованную среду, то петлю вводят в пробирку до конца и, слегка касаясь ею поверхности агара, проводят снизу вверх либо зигзагообразную, либо прямую черту - штрих. При этом стараются не повредить поверхности плотной среды. В случае пересева в жидкую среду (в колбы или пробирки) петлю с микробной массой погружают непосредственно в среду. Оставшиеся на петле после пересева или приготовления препарата клетки микроорганизмов тщательно сжигают в пламени горелки. Прокаливание петли в этом случае начинают с участка проволоки, примыкающего к кольцу, для того чтобы микробная масса, оставшаяся на петле, подсохла. Затем петлю переводят в вертикальное положение и прокаливают докрасна. Такой порядок стерилизации петли необходим потому, что при быстром нагревании влажной микробной массы происходит ее разбрызгивание и образуется аэрозоль, загрязняющий воздух. Только после прокаливания петлю можно положить на место.

Из жидкой среды клетки берут пипеткой. Пипетку за верхний конец вынимают из бумаги или пенала, в которых ее стерилизовали, и вводят в пробирку или колбу с культурой, соблюдая все правила предосторожности, описанные выше. Отбирать жидкую культуру пипеткой можно с помощью резиновой груши. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор, например 3-5%-й водный раствор фенола или 2%-й раствор хлорамина, не касаясь ею окружающих предметов.

Когда необходимо провести рассев микроорганизмов из жидкой питательной среды на поверхность плотной среды в чашке Петри, поступают следующим образом. Расплавленную на кипящей водяной бане стерильную питательную среду, содержащую агар или желатину, разливают в стерильные чашки Петри. Для этого сосуд со средой берут в правую руку, вынимают из него пробку, зажимая ее мизинцем и безымянным пальцем левой руки, обжигают горло сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и средним пальцами левой руки крышку чашки Петри, быстро наливают в чашку расплавленную среду в таком количестве (20-30 мл), чтобы дно чашки было полностью покрыто. Крышку тотчас закрывают и чашку оставляют на горизонтальной поверхности до тех пор, пока не застынет среда. Для посева приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхность плотной среды наносят каплю или «петлю» жидкой культуры, которую осторожно распределяют стеклянным стерильным шпателем (шпатель Дригальского) либо петлей.

Все описанные манипуляции следует проводить около пламени горелки, но не в пламени, по возможности быстро, чтобы не загрязнить культуру посторонними микроорганизмами. Не рекомендуется делать резкие движения и ходить около работающего с чистой культурой, так как движение воздуха увеличивает вероятность случайного ее загрязнения. После пересевов пробирки или другие сосуды, в которых выращивают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью терморегуляторов поддерживается постоянная температура.

Посуду с культурами микроорганизмов, подлежащими выбрасыванию, следует автоклавировать, чтобы убить клетки, и только после этого мыть. Культуры на плотных питательных средах можно заливать на сутки дезинфицирующим раствором, после чего их выбрасывают и посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приводит к возникновению бактериального аэрозоля.

Техника и методика посевов

Для посева могут быть использованы пересеваемые культуры бактерий или исследуемый материал (вода, почва, продукты питания и др.). При пересеве культуры с одной среды на другую или извлечения части культуры для приготовления мазка необходимо соблюдать условия, обеспечивающие предохранение чистой культуры от загрязнения посторонними микроорганизмами. Сохранение чистоты культуры является основой бактериологической работы: только при этом условии возможно выявление всех истинных свойств изучаемого микроорганизма (морфологических, биохимических и др.).

Культуру микроорганизмов извлекают из пробирки с помощью бактериологической петли или иглы, изготовленных из металлической (предпочтительно платиновой или нихромовой) проволоки.

Петлю вносят в пробирку с культурой в жидкой, полужидкой или на плотных средах только после тщательной ее стерилизаций в пламени газовой горелки или спиртовки. Для этого проволоку накаливают докрасна в пламени горелки и одновременно обжигают примыкающую к петле часть держателя, которая будет вводиться внутрь сосуда, содержащего микроорганизмы. Петлю рекомендуется держать в пламени горелки почти вертикально, чтобы проволока была равномерна раскалена на всем протяжении. При прокаливании необходимо помнить, что наивысшая температура развивается в верхней и периферической частях пламени, поэтому не следует опускать петлю непосредственно к горелке.

Сразу же после стерилизации петлю (иглу) вводят в сосуд с микроорганизмами. Чтобы не повредить клетки микроорганизмов, петлю вначале охлаждают, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к питательной среде, свободной от клеток микроорганизмов, и только после этого захватывают небольшое количество микробной массы.

Отбор культуры микроорганизмов, выращенных на плотной среде в пробирке, осуществляют следующим образом. Пробирку с культурой берут в левую руку так, чтобы поверхность питательной среды с налетом выросших микроорганизмов была обращена к верху и хорошо видна. Пробирку держат в горизонтальном или несколько наклонном положении.

В правую руку берут петлю так, как держат карандаш, и прокаливают ее в пламени горелки. Затем, не выпуская петли, мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижимают ватную пробку к ладони, вынимают ее пробирки и держат так во время последующих манипуляций. Края открытой пробирки с культурой микроорганизмов обжигают в пламени горелки и после этого вводят в пробирку стерильную петлю.

Взяв небольшое количество микробной массы с поверхности субстрата, вынимают петлю из пробирки, следя за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок или краев пробирки. Горлышко пробирки снова обжигают в пламени горелки, затем обжигают ватную пробку и закрывают ею пробирку. Если конец ватной пробки загорится, то не следует бросать пробку. Ее нужно ввести быстро в пробирку, где вата сама потухнет. Ни в коем случае нельзя дуть на загоревшуюся пробку, т.к. это только усилит горение. Если в момент пересева ватная пробка упадет на стол или на пол, то не следует снова вставлять ее в пробирку. Нужно либо хорошо обжечь ее, либо (что предпочтительнее) взять новую стерильную пробку и начать всю операцию заново. Закрытую ватной пробкой пробирку с культурой ставят в штатив, а извлеченный материал используют для пересева или приготовления мазка.

Пересев чистых бактериальных культур является наиболее частой манипуляцией в повседневной лабораторной практике. Пересев чистой культуры на свежую питательную среду необходим для сохранения жизнедеятельности микробов, т.к. при росте они извлекают из среды питательный материал и насыщают ее продуктами собственного обмена, вследствие чего среда становится непригодной для нормального роста микробов. При исследовании морфологических и биологических свойств микробов тоже необходимы посевы на свежие среды, т.к. их изучение проводится у культур определенного возраста. Для установления микробиологического диагноза и разрешения ряда практических задач (например, приготовление вакцин, культур-продуцентов, используемых в биотехнологии и др.) пользуются посевами чистых культур микробов.

Основным и непременным условием посева является сохранение чистоты культуры, т.е. постоянное сохранение в пробирке только одного вида микробов, без загрязнения его посторонними микроорганизмами. Для этого необходимо соблюдение всех деталей техники посева, обеспечивающих стерильность. Следует помнить, что, несмотря на быстроту всех манипуляций, открытые пробирки некоторое время соприкасаются с воздухом, всегда содержащим большое количество микробов. Чтобы не внести их в пробирки, все движения руки при посеве должны быть быстрыми, но точными и осторожными. Пробирки следует держать только наклоненными, т.к. в прямом положении в них в большей степени как бы "падают" вместе с пылью бактерии и грибки из воздуха. При посеве без защиты органов дыхания (ватно-марлевые повязки, респираторы, "лепестки" и др.) нельзя разговаривать, кашлять; в комнате не должно быть значительных колебаний воздуха. Недопустимо подметание пола во время или незадолго до посева.