Порядок выполнения работы

Задание 1.

Посев на плотные среды в чашки Петри бактериологической петлей

Посев в чашки Петри производят следующим образом: плотную питательную среду в пробирках или колбах расплавляют на кипящей водяной бане, охлаждают до 48-50 ⁰С и, соблюдая правила асептики, разливают ровным слоем толщиной 3 – 5 мм в стерильные чашки. Посев делают стеклянным шпателем Дригальского или петлей в виде параллельных или зигзагообразных (метод истощающего посева) штрихов.

Алгоритм «Посев на плотную питательную среду бактериологической петлей»:

- поставьте чашку Петри вниз дном слева от спиртовки;

- зафламбируйте бактериологическую петлю, возьмите материал для посева из пробирки;

- поднимите правой рукой крышку чашки Петри так, чтобы в щель между крышкой и ее дном прошла бактериологическая петля;

- втирайте микробиологический материал петлей на поверхность питательной среды возле края чашки;

- зафламбируйте микробиологическую петлю;

- охладите бактериологическую петлю, дотронувшись ее концом до внутренней стороны стенки чашки Петри;

- положите бактериологическую петлю на то место на поверхности среды, где нанесли микробиологический материал;

- продолжите делать посев штрихами по всей поверхности чашки, не отрывая петли от среды;

(Штрихи наносят через всю поверхность среды от одной стенки чашки к другой, противоположной и располагают их как можно ближе один к другому. Благодаря этому линия посева становится длинее, что дает возможность получить изолированные колонии.)

- закройте чашку Петри;

- зафламбируйте бактериологическую петлю, поставьте в банку;

-подпишите на крышке чашки название питательной среды и дату его изготовления;

- поверните чашку дном вверх, напишите номер дату посева, название культуры по бинарной номенклатуре;

(Подпись посуды осуществляется согласно Государственных санитарных правил ГСП 9.9.5.-080-02.)

Задание 2.

Посев в жидкую питательную среду бактериологической петлей

Посев в жидкую среду можно производить бактериологической петлей или пипеткой вблизи пламени горелки. Обе пробирки держат в слегка наклонном положении, чтобы не замочить ватно-марлевые пробки. Петлю с микробным материалом опускают непосредственно в стерильную среду и ополаскивают. При внесении клеток, взятых петлей из плотной среды, материал тщательно растирают по стенке пробирки у верхнего края жидкой среды, все время смывая его средой.

Алгоритм «Посев петлей в жидкую питательную среду»:

- возьмите бактериологическую петлю в правую руку, зафламбируйте ее;

- возьмите чашку Петри с культурой в левую руку;

- охладите петлю, дотронувшись к внутренней стенке чашки;

- возьмите материал с одной колонии;

- поставьте чашку Петри, возьмите пробирку с МПБ;

- возьмите мизинцем правой руки пробку пробирки и прижмите ее к ладони;

- зафламбируйте край пробирки;

- держите пробирку возле огня так, чтобы отверстие ее было дальше как на 10 см от огня;

- введите петлю в пробирку, разотрите на ее стенке материал;

- опустите петлю в питательную среду, смойте материал со стенки пробирки;

- выньте петлю из пробирки, не дотрагиваясь до ее стенок;

- зафламбируйте край пробирки, закройте ее пробкой;

- прономеруйте пробирку и поставьте ее в штатив;

- зафламбируйте петлю, поставьте ее в стакан.

Задание 3.

Ознакомиться с видами тампонов, которые используются для взятия патологического материала.

Посев проводят тампоном, которым был отобран материал для исследования. Тампоны изготавливают путем наматывания ваты на металлический, стеклянный или деревянный стержень. Тампоны бывают для зева (ротоглотки) и носа, а так же ректальные (для взятия патологического материала из прямой кишки). Тампоны для ротоглотки и носа изготовляют так: на кончик стержня туго наматывают вату, а посередине него делают ватную пробку. Вата кончика и пробки не должна соприкасаться между собой, иначе , если такой тампон опустить жидкую питательную среду, то оно будет впитано тампоном. Эти тампоны используют для взятия патологического материала и из уха , язвы, поверхности разных предметов окружающей среды. Ректальные тампоны изготавливают так: туго наматывают вату на конце стержня, потом вокруг стержня длиной 10-12 см, потом делают ватную пробку. Сделанные тампоны помещают в пустые, чистые и сухие пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 ⁰С на протяжении 20 мин.

Задание 4.

Провести взятие патологического материала с носа.

Патологический материал с носа берут ватным тампоном при обследовании на дифтерию, стафилококковое носительство, а так же при поражении слизистой оболочки носа при вирусных респираторных заболеваниях.

Алгоритм «Взятия патологического материала ватным тампоном с носа».

- предложите пациенту сесть лицом к свету;

- подпишите на пробирке тампона номер анализа;

- возьмите тампон в правую руку, освободите его от пробки;

- сделайте осмотр носовых ходов (нет ли травм слизистой);

- введите тампон в носовой проход до конца прохода (нельзя торкаться тампоном наружных поверхностей носа);

- соберите слизь со стенок одного носового прохода, хорошо прислоняя тампон;

- соберите слизь со стенок второго носового прохода этим самым тампоном, не обворачивая его вокруг оси;

- опустите тампон в пробирку.

Задание 5.

Провести посев тампоном на питательную среду.

Посев на питательные среды тампоном делают по такому принципу, как и бактериологической петлей, то есть необходимо качественно втереть материал на небольшой площади, обворачивая тампон вокруг его оси, а потом сделать его посев зигзагоподобными штрихами. Линия посева должна быть как можно длиннее, для получения изолированных колоний. Посев можно делать круговыми движениями, обворачивая тампон и чашку Петри.

Оформление и анализ результатов исследований

В отчете студенты кратко конспектируют теоретический материал. Описывают алгоритмы выполнения заданий. Делают соответствующие выводы.

Контрольные вопросы

1. Какие основные соединения усваиваемые бактериальной клеткой?

2. Каковы задачи транспортных систем бактериальной клетки?

3. Какие механизмы обеспечивают поступление веществ внутрь бактериальной клетки? Пассивный перенос.

4. Активный перенос веществ в бактериальную клетку.

5. Транспорт веществ, обусловленный фосфорилированием.

6. Аутотрофия и гетеротрофия.

7. Состав питательной среды для культивирования бактерий.

8. Классификация сред.

9. Посев материала микробиологической петлей на плотную питательную среду.

10. Посев материала микробиологической петлей на жидкую питательную среду.

11. Посев материала тампоном на питательные среды.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 8.

Тема: ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ БАКТЕРИЙ. МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. ЭТАПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ.

Цель работы: Научиться проводить взятие и посев исследуемого материала на жидкую и плотную питательные среды, охарактеризовать рост микроорганизмов на питательных средах.

Оборудование и материалы: Спиртовка; бактериологическая петля и препаровальная игла; пробирки со свежеприготовленным скошенным мясопептонным агаром (МПА); чашки Петри с МПА; пробирки с исследуемым материалом культур бактерий рода Bacillus и бактерий, не образующих спор; микроскоп; иммерсионное масло; фильтровальная бумага; набор красок для окраски по Граму (фильтровальные бумажки с генцианвиолетом, растворы Люголя и фуксина рабочего); 96 %-ный этиловый спирт: лоток с рельсами для предметных стекол; промывалка; салфетки