Выделение чистой культуры анаэробов.

1. Анаэростат (стационарный, портативный). Удаляют воздух, а кислород могут замещать атмосферным азотом или другим инертным газом.

2. Среды под вазелиновым маслом (Кита-Тароцци).

3. Высокий столби гагара и посев уколом.

4. Трубки Бури и Виньяль-Вейона (трубки, заполненные сахарным агаром с парафинированными концами) помещенные в термостат.

5. Химический метод с использованием эксикаторов (на дно укладываетсяхим.вещество, связывающее кислород на подставку помещают засеянные чашки, крышку плотно притирают и ставят в термостат).

6. Метод Фортнера. Агаровую пластинку разделяют на две части, вырезав полоску. На одну половину сеют строгие аэробы, на вторую – анаэробы. Крышку парафинируют и затем ставят в термостат. Сначала вырастают аэробы, а при отсутсвии кислорода кислорода, начинают расти анаэробы (метод используется редко).

Задание 5.

Изучить принцип работы анаэростата.

Задание 6.

Изучить состав сред Кита-Тароции и Вильсона-Блера.

Среда Кита-Тароцци (среда накопления. Состоит из МПА с 0,5% раствором глюкозы и кусочков печени, мясного фарша или ваты. Перед посевом среду кипятят 10-15 мин. Для удаления воздуха и быстро охлаждают. До или после посева для изоляции от атмосферного воздуха среду заливают стерильным вазелиновым маслом слоем в 1 см.

Среда Вильсона-Блера (железосульфитный агар). Состоит из МПА, к которому добавляют глюкозу, Na₂SO₃ FeCl₂ . Анаэробы образуют на этой среде колонии черного цвета за счет восстановления, Na₂SO₃ в Na₂S, который при соединении с хлоридом железа дает осадок черного цвета FeS.

Задание 7.

Изучить рост анаэробов на среде Кита-Тароции, создать заключение с его особенностях.

Задание 8.

Зарисовать трубки Бури и Виньяль-Вейона.

Задание 9.

Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты с анаэробами.

Препарат №

Препарат №

Препарат №

Схема выделения чистой культуры анаэробов по Цейслеру

Оформление и анализ результатов исследований

В отчете студенты кратко конспектируют теоретический материал. Описывают культуральные свойства выросших в чашках Петри колоний. Зарисовывают микроскопические картины выделенных из различных объектов чистых и накопительных культур с учетом морфологических особенностей каждого микроорганизма. Под каждым рисунком подписывают увеличение препарата. Делают соответствующие выводы.

Контрольные вопросы

1. Понятие о чистой и накопительной культуре

2. Методы выделения накопительных культур микроорганизмов

3. Методы выделения анаеробных культур (схемы)

4. Методы выделения аеробных культур (схемы)

5. Изучение культуральных особенностей микроорганизмов

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 9.

Тема: ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ, ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ. СОСТАВ ПЕСТРОГО РЯДА ГИССА И СЕРЕДА РЕССЕЛЯ.

Цель работы: Научиться выявлять ферментативную активность бактерий на дифференциально-диагностических средах, ознакомиться с методикой определения ферментативной активности бактерий с помощью энтеротестов и СИБ.

Оборудование и материалы: Демонстративный материал.

І. КРАТКИЕ ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Роль ферментов в жизнедеятельности бактерий. Все питательные вещества и любые элементы, подвергающиеся взаимодействиям и превращениям с участием бактерий, вступают в реакции при участии ферментов. Ферменты или энзимы – специфичные и эффективные белковые катализаторы, присутствующие во всех живых клетках. За каждое превращение одного соединения в другое ответственен особый фермент.

- Ферменты снижают энергию активации, обеспечивая протекание таких химических реакций, которые без них могли бы проходить только при высоких температурах, избыточном давлении, и при других нефизиологических условиях, неприемлемых для живой клетки.

- Ферменты увеличивают скорость реакции примерно на 10 порядков, что сокращает полупериод какой-либо реакции с 300 лет до одной секунды.

- Ферменты «узнают» субстрат по пространственному расположению его молекулы и распределению зарядов в ней. За связывание с субстратом отвечает определенный участок молекулы ферментативного белка – его каталитический центр. При этом образуется промежуточный фермент-субстральный комплекс, который затем распадается с образованием продукта реакции и свободного фермента.

Регуляторные (аллостерические) ферменты воспринимают различные метаболические сигналы в соответствии с ними изменяют свою каталитическую активность.

Эффекторные ферменты. Известно шесть основных классов ферментов, катализирующих следующие реакции: оксидоредуктазы – перенос электронов; трансферазы – перенос различных химических групп; гидролазы – перенос функциональных групп на молекулу воды; лиазы – присоединение групп по двойным связям и обратные реакции; изомеразы – перенос групп внутри молекулы с образованием изомерных форм; лигазы – образование связей С-С, C-S, C-O, C-N, за счет реакций конденсации, сопряженным с распадом АТФ.

- Бактерии способны синтезировать все ферменты, необходимые для утилизации широкого спектра питательных субстратов. Определенный субстрат в среде вызывает синтез ферментов, обеспечивающих его катаболизм. В этом случае говорят об индукции катаболических ферментов индуцирующим субстратом (индуцибельные ферменты). Образование анаболических ферментов в процессах биосинтеза регулируется путем репрессии конечным продуктом (репрессибельные ферменты). Если в среде имеются сразу два субстрата, то бактерия использует субстрат, обеспечивающий более быстрый рост. Синтез ферментов для расщепления второго субстрата репрессируется; такой вариант известен как катаболитная репрессия. Ферменты, синтезируемые вне зависимости от условий среды, - конститутивные ферменты.

Определение ферментативной активности бактерий играет огромную роль в их идентификации