Введение

Актуальность проблемы гепатита С обусловлена весомым социально-экономическим ущербом и эпидемической значимостью этого заболевания, повсеместным распространением, тяжестью течения, высокой частотой неблагоприятных исходов инфекции, активным вовлечением в эпидемический процесс лиц репродуктивного и трудоспособного возраста. По оценкам экспертов Европейской ассоциации по изучению болезней печени(Париж, 2005) более 500 млн человек в мире инфицированы гепатитом С. Только хронической формой инфекции страдают 150-170 млн жителей планеты [1, 2].

В настоящее время не вызывает сомнения тот факт, что именно хронические и латентные варианты гепатита С определяют основную часть эпидемического процесса, социальную значимость и прогноз данной инфекции [1].

Учитывая чрезвычайную сложность структуры эпидемического процесса и многофакторность его развития, закономерности течения этой инфекции в полной мере не раскрыты до настоящего времени. На течение инфекционного процесса гепатита С в постоянно изменяющихся социальных и природных условиях большое влияние оказывает значительная генетическая гетерогенность вируса [3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12].

Сравнение молекулярной вариабельности изолятов, выявляемых в разных популяционных группах на конкретной территории, может использоваться для нужд эпидемиологического надзора и в клинической практике. Несмотря на международные усилия по созданию серологических тест-систем для выявления маркеров инфекции, в настоящее время нет равно чувствительных иммунологических тестов к различным генотипам вируса гепатита С. Такая ситуация диктует необходимость использования молекулярно-генетических методов для изучения циркуляции различных генетических вариантов вируса гепатита С, установления источников инфекции, изучения путей передачи, прогнозирования эволюционных изменений эпидемиологической ситуации для предотвращения дальнейшего распространения гепатита С.(диссертация)

Целью дипломной работы является изучение морфо-биологической и генетической характеристики вирусного гепатита С и методов его диагностики.

Для выполнения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. изучить морфологическую и генетическую характеристику вируса гепатита С на основе литературных данных;

2. изучить клиническую картину гепатита С;

3. освоить методы диагностики вируса гепатита С;

4. провести сравнительный анализ ИФА и ПЦР «в режиме реального времени» при выявлении вирусного гепатита С.

Глава 1. Обзор литературы

Раздел 1. Общая харатеристика вируса гепатита с

1.1.1 Морфо-биологическая характеристика вируса гепатита с

Гепатит С – это инфекционное заболевание, вызываемое РНК-содержащим гепатотропным вирусом. Его особенность в длительном бессимптомном периоде, во время которого развиваются необратимые осложнения и существует возможность передачи здоровым людям [13].

Ранее гепатит С обозначали как «вирусный гепатит ни-А, ни-В», передающийся парентерально (термин предложен С. Файнстоуном в 1974 году). В 1977 г. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) включила его в предложенную тогда номенклатуру вирусных гепатитов, что значительно ускорило этиологическую расшифровку «гепатита ни-А, ни-В».

Применение новых молекулярно-биологических методов исследования позволило М. Houghton в 1988 г. клонировать и секвенировать геном вируса, что определило быструю разработку диагностических препаратов для определения маркеров вируса гепатита С. А в 1989 г. К.Чу с коллегами установили, что возбудителем является РНК-содержащий вирус, обладающий оболочкой. Авторы назвали его «вирусом гепатита С» [4, 14].

Исходя из этих данных и физико-химических свойств возбудителя был сделан принципиально важный вывод о возможной принадлежности вируса гепатита С к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus [5, 15]. Затем удалось идентифицировать вирус-специфические белки (NS3 – К.Чу, 1989; NS4 – Д.Куо, 1989). В последствие на их основе были созданы коммерческие радиоиммунологические и иммуноферментные тест-системы. А в 1990 г. Э. Уайнер с соавторами разработали метод идентификации генома вируса в сыворотке крови на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим анализом продуктов реакции с помощью Саузернблота [4].

Гепатит С – антропонозная вирусная инфекция с гемоконтактным механизмом передачи возбудителя, под которым понимают передачу вируса с кровью и другими биологическими жидкостями при обязательном повреждении кожных покровов или слизистых оболочек. Механизм заражения гепатита С реализуется с помощью искусственных (различные медицинские и немедицинские манипуляции, связанные с нарушением кожных покровов и слизистых оболочек) и естественных (вертикальный, половой и контактно-бытовой) путей передачи инфекции [16].

В мире инфицировано около 500 млн. чел. вирусом гепатита С. Особенностью этого РНК-вируса, передающегося парентеральным путем, является высокая частота развития хронического гепатита – 80 %. У вирусного гепатита С имеются свои как печеночные, так и внепеченочные проявления, которые так же, как при вирусном гепатите В связаны с аутоиммунными заболеваниями

В последние годы отмечено снижение доли искусственных путей передачи, в том числе инфицированных при внутривенном введении наркотиков, а также рост доли естественных путей, обеспечивающих сохранение ВГС как биологического вида [17, 18].

Гепатит С – инфекция, которая характеризуется первичной гепатотропностью, полиморфизмом клинических проявлений (феномен «айсберга»), длительным бессимптомным течением, исключительно высокой частотой хронизации (до 75-83%) с возможным переходом в цирроз (у 26-35% лиц с хроническим гепатитом С) и первичный рак печени(у 30-40% больных циррозом) [16, 19, 20].

Вирус гепатита С представляет собой небольшой (55-65 нм в размере) сферический РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae (рис. 1.1). ВГС является причиной развития гепатита С в организме человека. ВГС состоит из основного генетического материала (РНК), окруженной защитной белковой оболочкой, а также липидной (жировой) оболочкой сотовой структуры, которая содержит два оболочечных белка – гликопротеины E1, E2, встроенные в липидные оболочки.  Белки E1 и E2 обеспечивают проникновение вируса в клетку и закрепление в ней. Источниками заражения вирусом служат больные различными формами инфекции (преимущественно с бессимптомным течением).

Рисунок 1.1 – Строение вируса гепатита С [29]

Геном ВГС включает в себя  одноцепочную РНК, имеющую 9600 нуклеотидных оснований. На 5' и 3' концах РНК ВГС расположены не транслируемые регионы, имеющие приблизительно 340 и 60 оснований, которые важны для жизнедеятельности и репликации вирусной РНК. Гены, кодирующие структурные белки, расположены у 5' области генома вируса, а неструктурные – у 3' области (рис. 1.2).

Рисунок 1.2 – Вирусная РНК гепатита С [29]

5' участок генома вируса гепатита С кодирует три структурных белка ВГС: два оболочечных белка, кодированных зоной Е1 и Е2 и C (кор)  белок. 

3' область генома  кодирует неструктурные белки  NS2, NS3, NS4, NS4A, NS4B, NS5, NS5A и NS5B.Белки, кодированные с зон NS2  и NS4, выполняют клеточную мембранную функцию. Белок зоны  NS3 является РНК-протеазой. Белок, синтезированный NS4A зоной, выполняет стабилизирующую функцию. Зона NS5B представляет собой РНК-полимеразу. NS5A устойчив к интерферону и играет значительную роль в вирусном патогенезе.