- •Государственный университет
- •А.Г.Золотарев, и.В.Дармов, н.С.Мокрушина практикум по цитологии
- •Введение
- •Правила оформления отчетов по лабораторным работам
- •Порядок проведения занятий
- •Техника безопасности
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Оборудование и материалы
- •Лабораторная работа 1.1 Изучение устройства светового микроскопа
- •Микроскопическая техника.
- •Методики приготовления препаратов
- •Для цитологических исследований
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёте по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 1.2 Освоение правил работы с микроскопом «микмед-1» и техники микроскопирования
- •Устройство микроскопа
- •Бинокулярная насадка
- •Окуляры
- •Объективы
- •Револьверное устройство
- •Конденсорное устройство
- •Конденсор
- •Фокусировочный механизм
- •Осветительное устройство
- •Зеркало
- •Встроенный осветитель
- •Правила работы с микроскопом на лабораторных занятиях
- •1. Установка микроскопа
- •2. Размещение препарата
- •3. Настройка освещения в микроскопе с зеркалом
- •4. Настройка освещения в микроскопе со встроенным в основание осветителем
- •5. Фокусировка микроскопа
- •6. Исследование препарата
- •7. Завершение работы
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 2 Основы клеточной теории. Особенности строения прокариотических и эукариотических клеток
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Оборудование и материалы
- •Лабораторная работа 2.1 Изучение основ клеточной теории
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 2.2
- •Многоклеточного организма
- •Задание
- •Микроскопия мазка клеток крови лягушки
- •Микроскопия нервных клеток симпатического ганглия
- •Микроскопия клеток канальцев почки
- •Микроскопия клеток печени
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 2.3
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 2.4
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 3 Общие принципы структурно-функциональной организации плазмолеммы эукариотической клетки
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Оборудование и материалы
- •Лабораторная работа 3.1 Изучение состава и тонкого строения плазмолеммы
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчете по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 3.2 Усвоение функционального значения плазмолеммы
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 4 Структурно-функциональные особенности синтетического аппарата клетки
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Оборудование и материалы
- •Лабораторная работа 4.1 Изучение строения и функционального значения гранулярной и гладкой эндоплазматической сети
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчете по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 4.2
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 5 Структурно-функциональные особенности аппарата внутриклеточного переваривания
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Оборудование и материалы
- •Лабораторная работа 5.1 Изучение тонкого строения и функционального значения гидролазных пузырьков, эндосом и лизосом
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 5.2 Изучение тонкого строения и функционального значения пероксисом
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Тема 6 Структурно-функциональные особенности митохондрий
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Особенностей митохондрий
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 6.2 Изучение функционального значения митохондрий
- •Задание
- •Лабораторная работа 7.1 Изучение строения и функционального значения органелл, содержащих микротрубочки
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Тема 7 Структурно-функциональные особенности цитоскелета и его производных
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Материалы и оборудование
- •Задание
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 8 Структурно-функциональные особенности включений клетки
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Изучение структурно-морфологических особенностей
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 8.2 Изучение цитологических особенностей пигментных включений
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёт по лабораторной работе
- •Тема 9 Структурно-функциональные особенности ядра клетки
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Материалы и оборудование
- •Лабораторная работа 9.1 Изучение строения ядра и функционального значения его компонентов
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 9.2 Изучение уровней упаковки хроматина в ядре клетки и общей морфологии хромосом
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Тема 10 Механизм клеточного деления
- •Цели занятия
- •Вопросы и задания для самоподготовки
- •Материалы и оборудование
- •Лабораторная работа 10.1 Изучение клеточного и митотического циклов
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 10.2 Изучение морфологии клеток, делящихся амитозом
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчёте по лабораторной работе
- •Лабораторная работа 10.3 Изучение мейотического деления
- •Задание
- •Материалы, представляемые в отчет по лабораторной работе
- •Библиографический список
- •Перечень вопросов, включённых в экзаменационные билеты по курсу общей цитологии
- •Перечень гистологических препаратов, выносимых на экзамен
- •Перечень электронограмм, включенных в экзаменационные билеты
5. Фокусировка микроскопа
Движением кремальеры найдите фокус слабого увеличения, при котором препарат вполне ясно будет виден в поле зрения (рабочее расстояние между стеклом препарата и фронтальной линзой объектива при этом будет около 1 см).
Рассмотрите препарат при слабом увеличении. Сориентировавшись в препарате, найдите место, подходящее для изучения при сильном увеличении, поставьте его в центр поля зрения (передвигая препарат по столику при помощи препаратоводителя).
Не меняя положения тубуса, поверните плавным движением револьвер на сильный объектив (40× или 90×), проследив за замыканием засечки револьвера.
Очень осторожным движением рукоятки грубой фокусировки установите фокус сильного увеличения (при объективе 40× обычно нужно слегка опустить тубус до рабочего расстояния, равного 0,41 мм) и микрометрическими винтом отфокусируйте объект. При объективе 90× или 100× свободное расстояние будет меньше половины миллиметра (точнее 0,10 мм), поэтому при неосторожном движении можно легко раздавить препарат и повредить объектив.
При работе с объективом 90× или 100× нанесите на препарат стеклянной палочкой каплю иммерсионного масла. Наблюдая сбоку за просветом между объективом и препаратом, вращением рукоятки грубой фокусировки очень осторожно опустите тубус до соприкосновения объектива с каплей иммерсии. Добейтесь резкого изображения объекта с помощью тонкой фокусировки.
6. Исследование препарата
Изучите препарат при слабом или сильном увеличении, а затем приступите к зарисовке. Если нужное место оказалось недостаточно точно центрированным, можно улучшить центрировку небольшим движением винтов препаратоводителя (ими нужно пользоваться для окончательной центрировки препарата при сильном увеличении). При отыскивании нужного места не следует передвигать препарат по столику микроскопа пальцами.
7. Завершение работы
После окончания работы снимите чистой тряпочкой слой иммерсионного масла с объектива. Поверхность линз объектива протрите тряпочкой, слегка смоченной смесью спирта и бензина (калоша) в соотношении 1:1 или эфиром. Зачехлите микроскоп.
Задание
1. Освойте правила работы на микроскопе «МИКМЕД-1» путём микроскопирования окрашенного мазка крови человека с использованием объективов 9×, 90× или 100×.
Демонстрационный препарат крови человека, окрашенный по Романовскому-Гимза, рассмотрите под микроскопом сначала с объективом 9×. Основную массу клеток в поле зрения составляют эритроциты – красные кровяные тельца, окрашенные эозином в розовый цвет. В значительно меньшем количестве встречаются более крупные клетки, окрашенные в фиолетовый и розово-фиолетовый цвет. Это белые кровяные клетки – лейкоциты, лимфоциты и моноциты. Зарисуйте несколько эритроцитов и белых кровяных клеток.
Подпись под рисунком: Клетки крови человека. Демонстрационный препарат. Окраска: азур-эозин по Романовскому-Гимза. ×135.
На рисунке должны быть обозначены эритроциты и белые кровяные клетки.
Рассмотрите этот же препарат с объективом 90×. Он позволяет выявить более тонкие детали строения клеток. Обратите внимание, что у эритроцитов отсутствуют ядра, а в их центре обнаруживается небольшое просветление, что указывает на двояковогнутое строение этих форменных элементов крови.
Белые кровяные клетки отличаются наличием округлого, бобовидного, подковообразного или сегментированного ядра. Их цитоплазма базофильная, окрашена азуром в различные цвета от светло-голубого до фиолетового и может содержать гранулы. Лимфоциты отличаются наличием узкого ободка цитоплазмы, который удается различить только при некотором навыке работы. По этой причине создается впечатление, что данные клетки состоят только из ядра.
Зарисуйте несколько красных и белых кровяных клеток.
Подпись под рисунком: Клетки крови человека. Демонстрационный препарат. Окраска: азур-эозин по Романовскому-Гимза. ×1350.
На рисунке должны быть обозначены эритроциты, просветления в их центре; белые кровяные клетки, их цитоплазма и ядра различной формы.
2. Запишите в альбоме следующие требования, нарушать которые при работе с микроскопом категорически запрещается:
- вращать микровинт на малом увеличении и за пределы упора ограничителя;
- располагать препарат покровным стеклом вниз;
- пользоваться загрязненными препаратами, окулярами и другими оптическими частями;
- переводить микроскоп на большое увеличение, не добившись резкого изображения на малом;
- вынимать препараты из-под объектива большего увеличения;
- работать при слабом и неправильном освещении объекта.
