Работа №3. Колоночная хроматография на окиси алюминия.
Цель работы: познакомиться с методом колоночной хроматографии и осуществить процесс разделения органических красителей.
Выполнение работы.
Для хроматографического разделения веществ используют стеклянные колонки диаметром 8-10 мм и длиной около 50 см (например, бюретки). В нижнюю часть колонки помещают ватный тампон. Колонку закрепляют вертикально в штативе и через воронку аккуратно тонкой струйкой насыпают слой адсорбента – оксида алюминия, высотой 5 - 7 см. Для более равномерного заполнения колонки адсорбентом ее периодически постукивают куском резинового шланга.
В ступке смешивают по 5 - 10 мг красителей – азобензола и судана II, и осторожно растирают с небольшим количеством адсорбента. Эту смесь аккуратно засыпают в колонку и прижимают вторым тампоном.
В колонку заливают 7 - 10 мл тетрахлорметана и наблюдают за разделением смеси, собирая раствор красителя в пробирку или маленькую колбу. После выхода первого вещества в колонку добавляют 10 мл бензола и элюируют второе вещество в другой приемник.
Полученные фракции можно проанализировать методом ТСХ.
Работа №4. Тонкослойная хроматография на пластинках "Силуфол".
Цель работы: познакомиться с методом тонкослойной хроматографии и осуществить процесс разделения органических красителей в тонком слое.
Сущность работы.
Тонкослойная хроматография (ТСХ) применяется для разделения малых количеств веществ. С помощью этого метода решаются задачи идентификации веществ, проверка чистоты органических соединений, контроль за ходом химических реакций и др. Существует два способа проведения ТСХ: на незакрепленном и закрепленном слое. В последнем случае очень удобны промышленно изготовляемые пластинки “Силуфол” (Silufol, Чехословакия), представляющие собой тонкий слой силикагеля, закрепленный на алюминиевой фольге при помощи крахмала.
Для проведения работы потребуется хроматографический бокс, на дно которого нужно уложить кружок фильтровальной бумаги. Для насыщения хромобокса парами растворителя в него можно вставить по стенкам цилиндр из фильтрованной бумаги.
Выполнение работы.
В хромобокс наливают элюент – четыреххлористый углерод, слоем 0,5 – 0,7 см. Вырезают прямоугольную пластинку “Силуфола” размерами 5 х 5 см. На расстоянии 0,5 см от краев пластинки проводят простым карандашом горизонтальные линии (линия старта и линия финиша). Исследуемую смесь красителей и набор стандартных веществ («свидетелей») растворяют в пробирках и нумеруют. Тонкими стеклянными капиллярами набирают растворы веществ и, на расстоянии 0,5 - 0,7 см от краев и между собой, по очереди наносят на линию старта, лишь слегка прикасаясь капиллярами к пластине. Каждое вещество и смесь наносится своим капилляром. Точки не должны превышать 0,5 см в диаметре.
Подготовленную пластинку помещают в хромобокс, при этом слой элюента не должен покрывать нанесенные точки веществ. Фронт элюента поднимается по пластине вверх до линии финиша. Измеряют длину пробега пятен красителей и определяют коэффициент распределения Rf = l1/l2 для каждого вещества. Сравнивая коэффициенты распределения соединений, составляющих исследуемую смесь, и стандартных веществ-свидетелей, определяют состав смеси.
Хроматограмма смеси красителей () с веществами-свидетелями (1-4)