Занятие 5

Тема: Иммунный ответ при бактериальных инфекциях. Реакция связывания комплемента (РСК).

Вопросы для обсуждения:

1. Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях.

2. Методы оценки напряженности специфического антибактериального иммунитета.

3. Реакция гемолиза, ее практическое применение.

4. Ингредиенты, необходимые для постановки РСК, их получение.

5. С какой целью применяют индикаторную систему в РСК?

6. Техника постановки РСК

7. Практическое применение РСК.

Практические задания:

1. Изучить ингредиенты, необходимые для постановки реакции связывания комплемента, их получение и предшествующую подготовку.

2. Изучить схему постановки РСК.

3. Поставить по схеме реакцию связывания комплемента и произвести предварительный учет ее результата.

Таблица 1.

Схема основного опыта реакции связывания комплемента

Первая система				Вторая система
Ингредиенты (в мл)	Пробирки			Ингредиенты (в мл)	4-я про-бирка
	1-я опыт-ная	2-я контроль сыворот-ки	3-я контроль антигена
Исследуемая сыворотка, разведенная 1:5	0,5	0,5	-	Гемолитическая сыворотка в тройном титре	2,0 мл
Антиген в рабочей дозе	0,5	-	0,5
Комплемент в рабочей дозе	0,5	0,5	0,5	3% взвесь эритро-цитов барана	2,0 мл
0,85% раствор NaCl	-	0,5	0,5	Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 30 минут
Пробирки ставят в термостат при t 37ºС на 1 час				↓
	1,0	1,0	1,0	← смешивание ингредиентов

После смешивания ингредиентов 1-й и 2-й систем, пробирки ставят в термостат при tº 37ºС на 1 час

Результат учитывают предварительно после извлечения пробирок из термостата и окончательно после пребывания их в течение 18-20 часов в холодильнике.

4. Ознакомиться с учетом результатов РСК (демонстрация отрицательной и различной степени интенсивности положительной реакции).

Интенсивность реакции оценивают следующим образом:

“ ++++ “	- полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке;
“ +++ “	- неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов;
“ ++ “	- частичная задержка гемолиза: жидкость красная, небольшой осадок эритроцитов;
“ + “	- слабая задержка гемолиза: жидкость интенсивно красная, осадок эритроцитов незначительный;
“ – “	- полный гемолиз (лаковая кровь).

5. Нарисовать схему взаимодействия комплемента с комплексом АГ + АТ при положительном (а) и отрицательном (б) результате РСК.

а)

б)

Рис. 1. Реакция связывания комплемента:

а) положительная (отсутствие гемолиза);

б) отрицательная (гемолиз).

6. Зарисовать результаты разной степени положительной РСК и отрицательной РСК.