14.Принцип окраски бактерий по Граму, отличия клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Окраска по Граму относится к сложным методам окраски в виду использования двух красителей в поэтапном порядке.

Порядок проведения окраски

1. Из исследуемого материала готовят тонкий препарат-мазок, высушивают его на воздухе и фиксируют на пламени спиртовки.

2. На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги, пропитанной карболовым раствором генцианвиолета, и увлажняют его 2-3 каплями воды. Окрашивание продолжается 2 мин.

3. Сбросив пинцетом фильтровальную бумагу, на препарат наливают на 2 мин. раствор Люголя. Слив раствор Люголя, не промывая препарат, наливают на него для обесцвечивания несколько капель 96°спирта на 30 сек (обесцвечивание должно производиться при покачивании стекла).

4. Быстро смыв спирт водой, препарат докрашивают раствором фуксина Пфейффера в течение 1-2 мин., после чего промывают водой и высушивают.

Для окраски по Граму на одном стекле готовятся три мазка из разных культур (для контроля). Мазок в середине стекла готовят из изучаемой культуры, а по концам стекла с одной стороны – из культуры стафилококка (заведомо грамположительная); а с другой - из культуры кишечной палочки (заведомо грамотрицательная).

Стенка грамположительных бактерий после окраски по Грамму сохраняет комплекс йода с генциановым фиолетовым за счет толстых слоев пептидогликана (окрашены в фиолетовый цвет), грамотрицательные бактерии теряют этот комплекс и соответствующий цвет после обработки спиртом и окрашены в розовый за счет докрашивания фуксином.

Грамположительные (Г+)	Грамотрицательные (Г-)
Мощный слой пептидогликана (5-6 слоев)	1-2 слоя пептидогликана
Наличие тейхоевых кислот (до 5%)	Нет тейхоевых кислот
Мало липопротеидов	Содержит липопротеиды
Нет липополисахарида	Липополисахарид есть (о-антигн и эндотаксин)
Нет наружной мембраны	Есть наружная мембрана
От 20-60 нм, фермекутес	От 14-16 нм, тонкокожие

15. В каких случаях употребляются термины «бактерии», «бациллы», «клостридии»?

Термином «бактерия» обозначают в широком смысле всех представителей царства прокариотов, а в узком - палочковидные споронеобразующие бактерии.

Спорообразующие палочковидные бактерии подразделяют на бациллы [от лат. bacillus, палочка] и клостридии [от греч. kloster, веретено]. Это разделение было основано на способности центрально расположенных спор клостридии деформировать материнскую клетку, придавая им форму веретена. Позднее были открыты виды клостридии, споры которых располагаются на концах клетки, но это название закрепилось за отдельным видом. Споры бацилл не деформируют клетки.

Термин «бациллы» используется для грамположительных палочковидных бактерий, образующих внутриклеточные споры.

Термин «клостридии» используется для обозначения рода грамположительных облигатно-анаэробных бактерий способных продуцировать эндоспоры.