- •Основные характеристики возбудителя туберкулеза
- •Клеточная стенка МБТ
- •24 марта 1882 г. - доклад Роберта Коха о выделении микроорганизма, являющегося причиной
- •Современные научные знания
- •Микобактерии, вызывающие туберкулез, объединены в
- •В настоящее время возбудителями туберкулеза у человека в мире являются:
- •Нетуберкулезные микобактерии (НТМБ)
- •Основные характеристики возбудителя туберкулеза
- •Основные характеристики возбудителя туберкулеза
- •Микрокапсула МБТ
- •Цитоплазматическая мембрана МБТ
- •N.B! Жизнедеятельность МБТ обусловлена активностью различных ферментов
- •Цитоплазма МБТ
- •Размножение МБТ
- •Размножение МБТ
- •Устойчивость МБТ к неблагоприятным воздействиям внешних физических и химических факторов
- •Одно из характерных свойств МБТ - способность изменяться под воздействием внешних факторов
- •Полиморфизм МБТ
- •L-формы МБТ
- •L-формы МБТ
- •Геном МБТ
- ••4000 генов кодируют белки, которые определяют специфические особенности МБТ
- ••МБТ синтезируют все необходимые для жизнедеятельности компоненты: незаменимые аминокислоты, витамины, ферменты липидного обмена
- •Особенности генома МБТ, которые обеспечивают ДНК-полиморфизм
- ••Различия в количестве копий и локализации на хромосоме этих генетических элементов используют для
- ••В различных регионах мира распространены генетические семейства М. tuberculosis, получившие наименования Haarlem, Africa
- •Механизмы, обусловливающие лекарственную устойчивость МБТ
- •За каждым случаем возникновения лекарственной устойчивости у МБТ стоит какая-либо мутация в геноме
- •Механизмы действия противотуберкулезных препаратов
- •Механизмы действия новых противотуберкулезных препаратов
- ••Мутации в генах, отвечающих за синтез определенных белков, встречаются и у природных, «диких»
- ••При проведении правильной химиотерапии «дикие» мутанты практического значения не имеют
- ••В результате неадекватного лечения изменяется соотношение между лекарственно-устойчивыми и чувствительными МБТ – происходит
- •Клиническое значение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза
- •Современная стратегия борьбы с туберкулезом направлена на излечение не менее 85% больных
- •Внастоящее время доказано:
- •Лекарственно чувствительные МБТ –
- •МБТ, устойчивые к наиболее эффективным противотуберкулезным препаратам первого ряда – рифампицину и изониазиду
- •МБТ, устойчивые к наиболее эффективным
- •Распространенность МЛУ-ТБ в мире
- ••Расчеты, проведенные экспертами ВОЗ, показывают, что на три страны мира - Китай,
- •Методы диагностики туберкулеза
- •Правильно организованный диагностический процесс и использование современных методов диагностики позволяет верифицировать диагноз в
- •Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 29.12.2014 г. № 951
- •Пути выявления больных туберкулезом
- •Симптомы туберкулеза легких Симптомы общей интоксикации
- •Симптомы туберкулеза легких Симптомы общей интоксикации
- •Симптомы туберкулеза легких Симптомы поражения органов дыхания
- •Группы лиц, подлежащих обследованию на туберкулез
- •Материал для исследования на туберкулез
- •Наиболее специфичным для туберкулеза являются обнаружение:
- •Задачи лабораторной диагностики туберкулеза
- •Прямая (простая) микроскопия мазка мокроты на наличие кислотоустойчивых микобактерий (КУМ)
- ••Отличительное свойство МБТ - кислотоустойчивость, которая проявляется в способности сохранять окраску, даже при
- •Микобактерии туберкулеза (окраска по методу Циль-Нильсена)
- •Результаты исследования мазков мокроты на КУМ, окрашенных по Цилю-Нильсену
- •Бактериоскопия с окраской мазков люминисцентными красителями (LED-микроскопия)
- •Люминисцентная бактериоскопия (LED-микроскопия)
- •Молекулярно-генетические методы диагностики туберкулеза
- •ПЦР-диагностика
- •ПЦР- Real Teim
- •Молекулярно-диагностический тест GeneXpert
- •Видовая идентификация микобактерий
- •Идентификация комплекса микобактерий туберкулеза –
- •НТМБ: возбудители микобактериозов
- •Маркеры лекарственной устойчивости МБТ
- •Определение лекарственной чувствительности МБТ
- •Определение лекарственной чувствительности МБТ
- •Определение лекарственной чувствительности МБТ
- •Бактериологические (культуральные) методы диагностики туберкулеза
- •Выделение культуры МБТ на жидких питательных средах
- •BACTEC MGIT -960
- •Технология MGIT
- •Выделение микобактерий на плотных питательных средах
- •Выделение культуры МБТ на плотных питательных средах
- •Алгоритм исследования лекарственной чувствительности МБТ
- •Определение лекарственной чувствительности микобактерий
- •Благодарю за внимание!
Определение лекарственной чувствительности МБТ
1. чувствительность к рифампицину и изониазиду
2. устойчивость к рифампицину и изониазиду
Определение лекарственной чувствительности МБТ
•Набор GenoType® MTBDRsl
•фторхинолоны (gyrA)
•аминогликозиды/ циклические пептиды (rrs)
•этамбутол (emb406)
Бактериологические (культуральные) методы диагностики туберкулеза
Цели:
верификация диагноза
определение лекарственной чувствительности МБТ
Особенности
для получения положительного результата достаточно нескольких жизнеспособных МБТ в 1 мл материала
дорогостоящие методы, требующие специального оборудования
исследования выполняются в лабораториях специализированных противотуберкулезных учреждениях
медленный рост культуры на питательных средах – отсроченный ответ
Выделение культуры МБТ на жидких питательных средах
Используются специальные автоматизированные системы (BACTEC MGIT)
Положительный результат исследования – через 12- 14 дней
Отрицательный результат исследования – через 42 дня
В основе методики лежит изобретение индикаторной пробирки MGIT- Mycobacteria Growth Indicator Tube, в дно которой встроен флуоресцентный кислородный датчик
BACTEC MGIT -960
Технология MGIT
Отрицательная проба |
Положительная проба |
|
O2 |
|
O2 |
|
Свободное |
|
|
O2 |
CO2 |
|
|
пространство |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O2 |
O2 O2 |
|
Жидкая пит. |
||
|
CO2 |
O |
|
|||
|
|
среда |
||||
|
O2 |
CO2 |
2O2 |
|
|
|
|
FO2 |
FO |
FO2 |
|
|
|
|
FFO2 |
2F |
|
Флуоресцент- |
||
|
FO2FFO2FO2 |
|
ный датчик |
|||
|
|
|
|
|
|
|
O2 O2
O2
O2
O2
CO2
F F F F
FO2 F
F F FO2 F
Кислород
потребляющие
бактерии
Флуоресценции нет |
Сильная флуоресценция |
Выделение микобактерий на плотных питательных средах
Проводится культивирование микобактерий на специально подготовленных средах Левенштейна- Йенсена и Финна- 2
Для диагностики туберкулеза применяется крайне
редко
Рост культуры МБТ наблюдается на 14-90 день посеваСухие кремовые шероховатые колонииРезультат исследования: + до 20 колоний, ++ от 20 до 100
колоний, +++ более 100 колоний
Выделение культуры МБТ на плотных питательных средах
Алгоритм исследования лекарственной чувствительности МБТ
Определение лекарственной чувствительности микобактерий
Молекулярно-генетические методы – в течение нескольких часов- 1-5 дней
Фенотипический метод на жидких питательных средах – в течение 7-10 дней
N.B! Существуют достоверные методы определения ТЛЧ МБТ только к противотуберкулезным препаратам, обладающим бактерицидным действием
