Технологические принципы приготовления диагностических препаратов

Одним из важнейших звеньев борьбы с инфекционными и паразитарными заболеваниями сельскохозяйственных животных является специфическая диагностика. От правильности ее проведения зависит выбор необходимых мер борьбы с конкретной инфекцией. Проведение диагностических исследований инфекционных заболеваний возможно лишь при наличии в лабораториях или у практических ветеринарных врачей диагностикумов, производство которых осуществляется на предприятиях биологической промышленности.

Прежде чем рассматривать основные технологические принципы приготовления диагностических препаратов, следует отметить, что таких препаратов, приготовляемых биологической промышленностью и применяемых в ветеринарной медицине, много. Все они подразделяются на четыре группы:

1) диагностические иммунные (специфические) сыворотки;

2) антигены-диагностикумы;

3) бактериофаги;

4) аллергены.

Каждая из этих групп в свою очередь подразделяется на отдельные подгруппы, типы в зависимости от технологии их получения, технологии, цели и практического применения.

Основным требованием к получению диагностических препаратов является тщательная подготовка и селекция производственных штаммов микроорганизмов с отбором колоний гладкой формы (кроме возбудителя сибирской язвы) и преобладанием необходимого антигена.

Диагностические сыворотки

К диагностическим специфическим сывороткам, применяемым для обнаружения в тех или иных материалах антигенов или для определения вида и даже типа микроба или вируса, относятся агглютинирующие, преципитирующие и лизирующие (комплемент- связывающие). Такая классификация основана на функциональной способности специфических гамма-глобулинов склеивать (агглютинировать), осаждать (преципитировать), растворять (лизировать) соответствующие антигены.

Агглютинирующие сыворотки и технология их приготовления

Агглютинирующие сыворотки готовят путем гипериммунизации животных различными корпускулярными антигенами, введением их парентеральным путем. В качестве антигенов используют живые или убитые различными способами культуры соответствующих микробов. В связи с непостоянным содержанием антигенных компонентов у одного и того же вида бактерий желательно животных иммунизировать несколькими штаммами (2—3) этого вида микроба. Для получения поливалентных агглютинирующих сывороток прибегают к одновременному введению смеси антигенов из нескольких типов бактерий одного и того же вида. В процессе работы необходимо следить за однородностью популяции штамма, используемого для иммунизации. Лучшим способом сохранения агглютиногенных свойств является лиофильное высушивание.

В большинстве случаев для получения полноценных агглютинирующих сывороток используют в качестве антигенов культуры микробов в S-форме. Реже требуются О- или R-варианты. Для получения сывороток лучше использовать в качестве антигенов живые культуры бактерий или вирусов, в ряде случаев для иммунизации животных использовать вновь пересеянные (суточные) культуры микробов.В ряде случаев введение живых культур может вызывать тяжелую реакцию организма иммунизируемых животных и даже ихгибель. Поэтому, где это допустимо, животных иммунизируют убитыми взвесями микроорганизмов.

При получении агглютинирующих сывороток необходимо иметь в виду, что микробная клетка имеет очень сложную антигенную структуру. Она состоит из могочисленных антигенов, расположенных в различных местах тела клетки (соматические О- и К-антигены) и в ее жгутиковом аппарате (Н-антигены).

О-антиген термостабилен, он создает медленно выпадающую зернистую или комковатую агглютинацию, трудно разбивающуюся при встряхивании. О-агглютинирующие сыворотки склеивают микробные клетки по полюсам. При этом подвижность у таких микро¬бов не утрачивается (например, у лептоспир и других подвижных микробов).

К-антигены располагаются в теле микробной клетки наиболее поверхностно и полностью прикрывают собой О-антигены. Это и объясняет инагглютинабильность культур, имеющих К-антигены. К-антигены термолабильны и состоят из нескольких фракций (Vi, В, L, А). Микробные клетки при К-агглютинации склеиваются между собой всей соприкасающейся поверхностью. Считают, что глубинные соматические или О-антигены проявляются в реакции агглютинации лишь у диссоциированных штаммов, находящихся в R-форме.

У подвижных жгутиковых микробов имеются Н-антигены. Они термолабильны и образуют с гомологичными сыворотками крупный хлопьевидный осадок. Н-агглютинирующие сыворотки склеивают бактерии жгутиками, поэтому они становятся неподвижными.

Для получения диагностических агглютинирующих сывороток чаще всего используют кроликов. Иммунизацию в большинстве случаев проводят внутривенным способом в нарастающих дозах и интервалами в 4 суток. Обычно производят 3—4 инъекции антигена.

Подкожный метод введения антигена применяют обычно для первичного введения в случае повышенной его токсичности. Пробное взятие крови с целью установления титров агглютининов проводят через 6—7 суток после последнего введения антигена. Следовательно, весь цикл иммунизации длится около месяца.

Диагностические агглютинирующие сыворотки готовятся к лептоспирам, листериям, бруцеллам, кампилобактериям и другим микроорганизмам. Технология их изготовления аналогична описанным с учетом отдельных особенностей в каждом конкретном случае, что регламентируется соответствующими инструкциями.