Аллергены, технология их приготовления

Аллергическая диагностика ряда инфекционных (чаще хронических) заболеваний животных и людей основана на феномене сохранения повышенной чувствительности организма к повторному введению того же антигена. В основе такой повышенной чувствительности лежат реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), которые проявляются спустя несколько часов, иногда суток после введения аллергена чувствительному (больному) организму. Обычно ГЗТ представляют собой клеточный феномен, в котором клетками-эффекторами, вступающими во взаимодействие с антигеном (аллергеном), являются сенсибилизированные Тгзт-лимфоциты лимфатических тканей и органов (лимфатических узлов, селезенки, грудного протока, перитониальной жидкости, периферической крови и т. д.). Такие реакции выявляются постановкой кожных проб соответствующим аллергеном, и они связаны с клеточными механизмами. Для возникновения ГЗТ, как показывает широкий опыт аллергической диагностики многих хронических инфекционных болезней, необходим длительный контакт организма с антигенами инфекционного агента. Состояние ГЗТ обычно развивается через 2—3 недели после заражения организма и может сохраняться годами. Уровень аллергии непостоянен, может меняться в широких пределах и даже временно исчезать под действием различных факторов, например, при истощении. Животные в состоянииаллергии отвечают на введение аллергенов общей и местной реакцией. Особенно демонстративно протекает реакция при введе¬нии аллергенов внутрикожно и нанесение их на конъюнктиву. В толще кожи образуется инфильтрат, внешне проявляющийся припухлостью различной консистенции и болезненности. Инфильтраты возникают через несколько часов после введения аллергенов и достигают наибольшего развития через двое-трое суток. При нанесении аллергенов (туберкулина, маллеина) на конъюнктиву развивается гнойный конъюнктивит. Наибольшая интенсивность реакции наблюдается через 6—9—12 часов после нанесения аллергенов на конъюнктиву.

При подкожном и внутривенном введении аллергенов зараженные животные реагируют повышением температуры тела, учащенным дыханием, пульсом.Технология приготовления туберкулинов

Для диагностики туберкулеза отечественной биопромышлеиностью готовят два аллергена для млекопитающих — сухой очищенный туберкулин PPD — в русской транскрипции ППД (Purified Protein Derative), и альттуберкулин (АТК). Для диагностики туберкулеза птиц готовят сухой очищенный туберкулин (ППД).

Для приготовления ППД-туберкулина и альттуберкулина для диагностики туберкулеза млекопитающих используют производственные штаммы возбудителя туберкулеза бычьего вида. Их выращивают в модифицированной среде Соттона с аспарагином и лимонной кислотой в течение двух месяцев.

Для изготовления туберкулина такую культуру подвергают ав- токлавированию. Затем белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой, центифугированием и повторным осаждением сернокислым аммонием. При этом потери белка могут составлять до 50%. По данным В. Е. Козлова с соавторами (1996), они могут быть снижены на 10—12% добавлением 0,1% фенола при осаждении белков высокими концентрациями трихлоруксусной кислоты и использованием той же концентрации фенола при переосаждении протеина сернокислым аммонием. После осаждения протеина надосадочную жидкость удаляют, преципитат растворяют дистиллированной водой и подвергают диализу в мешочках из диализной или белкозиновой ленты для удаления остатков сернокислого аммония. А. А. Конарев с соавторами (1996), Е. Н. Солодов с соавторами (1996) предложили для обессоливания растворов туберкулина пилотную установку — электродиализатор «Родник-ЗМ». позволяющую интенсифицировать процесс диализа в 16—24 раза.

После диализа раствор туберкулина подщелачивают и подвергают фильтрации через стерилизующие пластины или мембраны на основе ароматического полиамида с периодической регенерацией их поверхности (Карпов И. Н. и др., 1996). Полученный туберкулин проверяют на стерильность и содержание органических веществ, расфасовывают в ампулы или флаконы объемом 10—20 см3 и подвергают лиофильной сушке. Затем ампулы запаивают под вакуумом, флаконы заполняют стерильным азотом или осушенным стерильным воздухом и герметизируют.

Основной фракцией ППД-туберкулина является белок (73— 90%). Кроме того, он содержит 4—5% полисахаридов, 1—2% нуклеиновых кислот и до 11% липидов. Контроль туберкулинов осуществляют на растворимость, стерильность, концентрацию водородных ионов, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц (ТЕ). Активность выпускаемых серий ППД должна составлять 50 000 ТЕ/мл.

Альттуберкулин (АТК) представляет собой стерильный фильтрат двухмесячной культуры микобактерий, выращенной в мясо- гидролизатном картофельно-глицериновом бульоне и выпаренный до 1/10 первоначального объема с добавлением 20% экстракта биомассы микобактерий. После его изготовления он контролирует¬ся аналогично ППД-туберкулину. Активность выпускаемых серий АТК составляет 90000 ТЕ/мл.

Производство ППД-туберкулина для диагностики туберкулеза птиц осуществляется по технологии ППД-туберкулеза для млекопитающих. Главным отличием является то, что в качестве производственных штаммов используют микобактерий птичьего вида. Выпускаемые серии ППД-туберкулина для птиц содержат 50000 ЕД/мл.