Тема 15 Подсчет числа хромосом на временных препаратах

Цель:

- ознакомить с методом подсчета числа хромосом

План:

1 Подсчет числа хромосом на временных препаратах из зачаточных листочков

Методические рекомендации по подготовке к занятию

Листочки размером 3-7 мм предварительно фиксируют в уксусном алкоголе, затем их мацерируют в смеси соляной кислоты и метилового спирта (1:1) и окрашивают ацетокармином. Приготовленный таким образом препарат можно заключить в жидкость Смита, и он будет храниться продолжительное время.

Порядок выполнения задания.

1. Приготовить фиксатор – уксусный алкоголь.

2. Листочки опустить в бюкс с фиксатором и выдержать там в течение 1-4 ч.

3. Слить фиксатор и налить в бюкс смесь крепкой соляной кислоты и метилового спирта (1:1). Продержать листочки в этой смеси в течение 5 минут.

4. Смесь слить и налить в бюкс дистиллированную воду, в которой листочки следует промывать в течение 5 минут.

5. Пинцетом перенести объект на предметное стекло в каплю ацетокармина и осторожно расправить его препаровальной иглой, накрыть покровным стеклом и нагреть над пламенем спиртовки до закипания ацетокармина. Затем осторожно раздавить листочек деревянной палочкой.

6. Чтобы временный препарат перевести в постоянный, ацетокармин нужно заменить просветляющей и консервирующей жидкостью Смита; ее осторожно наносят с одного края покровного стекла. В то же время с другой стороны стекла полоской фильтровальной бумаги удаляют лишний ацетокармин.

7. Препарат просмотреть под микроскопом и, осторожно надавливая препаровальной иглой, удалить воздушные пузырьки.

8. Полученный препарат рассмотреть при объективе 90х и окуляре 10х. Пользуясь рисовальным препаратом или окулярной сеткой подсчитать число хромосом.

Литература: 8, с.15-22

Контрольные вопросы:

1 Перечислите, какой формы могут быть хромосомы

2 На какой стадии митоза удобно изучать форму и размер хромосом?

3 Что такое идиограмма хромосом?

Тема 16 Подсчет числа хромосом на постоянных препаратах

Цель:

- ознакомить с методом подсчета числа хромосом

План:

1 Подсчет числа хромосом на постоянных препаратах

Методические рекомендации по подготовке к занятию

Постоянные препараты с поперечными срезами корешков соответствующего растения помещают на предметный столик микроскопа, тщательно, ряд за рядом, просматривают срезы при объективе 9х и окуляре 15х и отыскивают метафазные пластинки с наиболее удобным для подсчета расположением хромосом. Хромосомы должны лежать свободно, не налегая одна на другую. пластинки отмечают, либо делая соответствующую запись в тетради, либо обводя нужный срез с нижней стороны предметного стекла тушью. Если микроскоп имеет столик- препаратоводитель, то можно записать показания горизонтальной и вертикальной шкал. Отмечают 5-10 таких пластинок на нескольких препаратах изучаемого растения.

Для подсчета числа хромосом необходимо брать клетки, не поврежденные ножом при резке на микротоме. С этой целью отмеченные клетки перед подсчетом проверяют при иммерсионном объективе 90х путем различной фокусировки объекта. Вращая микровинт, устанавливают объектив таким образом, чтобы был виден верхний слой цитоплазмы. По мере вращения микровинта вначале появляются размытые контуры хромосом, затем они становятся четкими. При дальнейшем движении микровинта хромосомы опять теряют четкость и снова становится, виден слой цитоплазмы. Если пластинка разрезана микротомным ножом, то либо на верхней, либо на нижней поверхности клетки вместо цитоплазмы бывают видны контуры хромосом.

Подсчет числа хромосом производят с максимально возможным увеличением – лучше всего с иммерсионным объективом 90х и окуляром 10х. Для этой чтобы точно подсчитать число хромосом, их обязательно следует тщательно зарисовать. Для этой цели лучше всего пользоваться рисовальным аппаратом. Рисовальный аппарат отбрасывает изображение метафазной пластинки на бумагу. Слегка вращая микровинт, добиваются четкого изображения рисуемой хромосомы и постепенно обводят ее контуры остро отточенным карандашом. Когда будет зарисована одна хромосома, начинают рисовать следующую и таким образом зарисовывают все хромосомы метафазной пластинки.

Литература: 8, с.15-22

Контрольные вопросы:

1 Как называется хромосома, состоящая из многих редуплицированных, но не разошедшихся хроматид?

2 Как называются две половинки хромосомы после редупликации, соединенные центромерой?