Задания к лабораторному занятию

1. Приготовьте из агаровой культуры кишечной палочки мазок на стекле, окрасьте по Граму. Изучите окрашенный мазок под микроскопом.

2. Изучите демонстрационные препараты брюшнотифозных, паратифозных бактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, дизентерийных бактерий, холерного вибриона. Обратите внимание на общность морфологических признаков всех представителей семейства Enterobacteriaceae. Зарисуйте в альбом.

3. Ознакомьтесь с ростом кишечной палочки на дифференциально-диагностических средах (бромкрезоловая среда, среды Эндо, Левина, Плоскирева).

4. Изучая рост на средах Гисса, определите вид микроорганизмов, используя дифференциально-диагностическую таблицу кишечно-тифозной группы.

5. Поставьте реакцию агглютинации на стекле:

   1. Для этого приготовьте смесь агглютинирующих сывороток против энтеропатогенных кишечных палочек. В смесь введите 5 отдельных сывороток, каждую в разведении 1:10 в объеме 1мл.

   2. Добавьте к 5 мл смеси сывороток 5 мл физиологического раствора.

   3. Предметное стекло поделите стеклографом пополам.

   4. На одну половину нанесите каплю изотонического раствора хлорида натрия, а на другую-каплю смеси сывороток.

   5. Часть лактозоположительной колонии на среде Эндо снимите петлей и внесите в каждую каплю.

   6. Перемешайте петлей до получения равномерной взвеси круговыми движениями в каждой капле.

   7. Стекло можно слегка подогреть, высоко держа над пламенем горелки в течении 2-4 минут. Реакция протекает быстро. Наблюдайте за появлением зерен агглютината в каплях.

   8. Учет производите через3-5 минут после появления зерен агглютината в капле с сывороткой.

С каждой чашки исследуют не менее 10 колоний. Если ни одна из них не агглютинируется, дают ответ: "Энтеропатогенные кишечные палочки не обнаружены".

1. Если реакция агглютинации положительная, из оставшейся части колонии сделайте пересев на скошенный агар и короткий "пестрый " ряд (среды Гисса с лактозой и глюкозой).

1. Поставьте реакцию агглютинации Видаля (иммитационная постановка). Реакцию Видаля ставят в трех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные (контроль сыворотки и контроль диагностикума):

   1. Разлейте по 1 мл в каждую из 5 пробирок ряда изотонический раствор хлорида натрия.

   2. Внесите в первую пробирку ряда 1 мл сыворотки разведенной 1:50. Затем сделайте серию разведений сыворотки путём последовательного переноса 1 мл из 1 пробирки во 2, из 2 в 3 и т.д. Из 5 пробирки 1 мл разведенной сыворотки удалить для сохранения одинакового объема.

   3. В контрольную пробирку (контроль диагностикума) внесите 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, а в контрольную пробирку (контроль сыворотки) внесите 1 мл сыворотки.

   4. В каждую пробирку с разведениями сыворотки и в пробирку (контроль диагностикума) внесите по 1 капле соответствующего диагностикума.

   5. Пробирки встряхните и поместите в термостат на 2 часа при температуре 37ºС, а затем инкубацию продолжите при комнатной температуре до следующего дня.

Схема проведения реакции Видаля

Ингредиент	Номер пробирки					Контроль
						сыворотки	диагностикума
	1	2	3	4	5	6	7
Изотонический раствор натрия хлорида,мл	1	1	1	1	1	–	1
Сыворотка больного в разведении 1:50,мл	1	1	1	1	1	1	–
Диагностикум, капли	1	1	1	1	1	–	1
Полученное разведение сыворотки	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600	1:50

Учет реакции агглютинации производите оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном встряхивании.

Интенсивность реакции агглютинации отмечают следующими знаками:

+ + + + полная агглютинация - хлопья агглютината в абсолютно прозрачной жидкости;

+ + + неполная агглютинация - хлопья в слабоопалесцирующей жидкости;

+ + частичная агглютинация - хлопья различимы, жидкость очень мутная;

+ слабая, сомнительная агглютинация - жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы;

– отсутствие агглютинации - жидкость равномерно мутная.

Реакцию учитывают как положительную при наличии отчетливой агглютинации, выраженной не менее + + в опытной пробирке, и отсутствии агглютинации в обоих контрольных пробирках. За титр сыворотки принимают последнее ее разведение, в котором интенсивность агглютинации оценивается не менее чем + +. Диагностический титр антител в реакции Видаля - 1:200.

7. Изучите коллекцию препаратов для диагностики, специфического лечения и профилактики кишечных инфекций.