Количественное определение бактерий и грибов

Посевы на питательных средах № 1 и № 2 просматривают ежедневно, определяя соответственно количество бактерий и грибов. Через 5 суток подсчитывают общее количество бактерий (грибов) на двух мембранах, находят среднее значение, округляют до целого, тем самым, вычисляя общее число в 1 г образца.

Для получения достоверных результатов учитывают только те чашки Петри, в которых на поверхности мембраны отмечен рост до 100 колоний микроорганизмов. Если на поверхности мембраны нет роста, результаты отмечают следующим образом: «В 1 г (мл) лекарственного средства бактерии (грибы) не обнаружены.

Если число колоний на мембране превышает 100, делают ряд дальнейших последовательных разведений образца (1:100, 1:1000 и т.д.)

Для фильтрации выбирают разведение, при котором число колоний на мембране не превышает 100. В этом случае при вычислении числа микроорганизмов в 1 г (мл) среднее значение количества колоний, полученное на двух чашках, умножают на соответствующий коэффициент (10, 100 и т. д.).

Выявление и идентификацию бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus осуществляют по окончании инкубации, как описано для метода прямого посева.

Количественное определение бактерий сем. Enterobacteriaceae (e.Coli)

Посевы на питательной среде № 4 просматривают в течение 24-48 часов. При наличии на мембранах роста колоний грамотрицательных палочек, типичных для семейства Enterobacteriaceae , подсчитывают их число на двух мембранах, находят среднее значение, округляют до целого, тем самым вычисляя число бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1г образца.

Для количественного определения E.coli в препарате подтверждают рост на среде № 4 (малиновые колонии с металлических блеском или без него, либо розовые или серовато-кремовые в цвет среды диаметром 2-4 мм). Ставят тесты на фермент цитохромоксидазу (отрицательный), утилизацию цитрата натрия (отрицательный) и индол (положительный).

Задания к лабораторному занятию

1. Определите микробиологическую чистоту нестерильных лекарственных средств методом прямого посева (общее количество сапрофитных бактерий и грибов).

2. Определите микробиологическую чистоту не стерильных лекарственных средств, обладающих антимикробным действием, методом мембранной фильтрации.

Результаты оценки микробиологической чистоты следует оформлять в виде таблицы 1.

Таблица 1

Микробиологическая чистота лекарственного средства

Исследуемое лекарственное средство	Разведение	Количество микроорганизмов в 1 г, мл
		Бактерий	Грибов		Бактерий семейства Enterobacteriaceae	S.aureus	P.aeriginosa
			Дрож-жевых	Плесне-вых

Заключение:

Тема: Стерильные лекарственные средства. Понятие о пирогенах. Методы определения стерильности лекарственных средств.

Цель: знать требования, предъявляемые к производству стерильных лекарственных средств освоить фармакопейные методы определения стерильности.