7. Осмотическая резистентность эритроцитов

Резистентность эритроцитов

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в клинике определяют осмотическую резистентость эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85 %) раствора хлорида натрия (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора хлорида натрия, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л.И. Идельсона.

Принцип. Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах хлорида натрия.

Реактивы. Основной раствор (по осмотической концентрации соответствует 10%-му раствору хлорида натрия), pH 7,4: натрия фосфат двузамещенный безводный (NaHPO) — 27,31 г или двухводный (NaHPO х 2HO) — 34,23 г; натрия фосфат однозамещенный двухводный (NaHPO х 2HO) — 4,86 г; натрия хлорид — 180 г; дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике в течение нескольких месяцев. Основной раствор разводят в 10 раз дистиллированной водой и получают раствор, по своей осмотической концентрации соответствующий 1%-ному раствору хлорида натрия. Из этого раствора готовят рабочие растворы, соответствующие растворам натрия хлорида следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10 %. Целесообразно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов. Хранят в холодильнике, пригодны в течение 2 недель.

Специальное оборудование. Фотоэлектроколориметр. Термостат на 37°С.

Ход определения: В две стерильные пробирки с 2 каплями гепарина (500 ЕД) вносят по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для исследования, а вторую оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 шт.) разливают по 5 мл каждого из рабочих растворов с концентрацией натрия хлорида от 1 до 0,10%. В каждую пробирку добавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Центрифугируют смесь при 2000 об/мин. в течение 5 минут. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и фотометрируют при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против контрольной пробы. Контрольная проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащая рабочий раствор с концентрацией хлорида натрия 1%. Расчет. За полный (100%) гемолиз принимают гемолиз в пробирке с 0,1%-ным раствором хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величину экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100% по формуле:(ЕX х 100)/ Е1, где Е1 — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1%-ным раствором хлорида натрия; ЕX — экстинкция исследуемой пробы; 100 — полный гемолиз в пробирке с 0,1%-ным раствором хлорида натрия. На следующий день повторяют исследования с кровью, инкубированной в течение 24 ч при 37°С.

Нормальные величины. У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации хлорида натрия 0,50–0,45%, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40–0,35%-ном растворе хлорида натрия.

Клиническое значение. Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70–0,75%) наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий, возможно при механической желтухе.