Противовирусное действие антител

Мишень	Агент	Механизм
Внеклеточные вирионы	Антитела без комплемента	Нейтрализуют инфекционность вириона, препятствуют связыванию с рецептором, проникновению в клетку и депротеинизации вируса
	Антитела + комплемент	Нейтрализуют инфекционность, повреждают оболочку вириона, блокируют клеточные рецепторы для вирусов
Клетки, зараженные вирусом	Антитела + комплемент	Лизис инфицированных клеток, опсонизация вирусных частиц или инфицированных клеток для фагоцитоза
	Антитела, связанные с антигенами вируса на зараженных клетках	АЗКЦ, опосредованная ЕК-клетками, макрофагами, нейтрофилами

Часто, особенно при острой продуктивной форме вирусной инф., больной выздоравливает раньше, чем в его кр.появляются АТ в достаточном титре. Выздоровление наступает за счет активного действия систем Т-киллеров и ИФ, но они не формируют приобретенного специф.им-та. Его возникновение происходит в связи с синтезом специф.АТ. Синтез и эффективность АТ связаны с системами макрофагов и др. АПК, В-лимф., Тх 2 типа (CD4⁺) и ГКГС.

Активированные Тх синтезируют факторы активации, пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов. В результате образуются клоны АТпродуцирующих кл. и клоны кл. памяти (соответственно и клоны кл. памяти Т-лимф).

При сохранении достаточного уровня вирусспецифических клонов В-клеток памяти приобретенный гуморальный противовирусный иммунитет может быть пожизненным.

4. Механизмы ускользания вирусов от защитных факторов организма

1. АГ изменчивость (ВИЧ, вирусов гриппа, ящура).

2. Подавление синтеза кл.б-ков.

3. Блокирование действия ИФ(вирус Эпштейна-Барр, аденовирусы).

4. Поражение иммунокомпетентных кл. (В- и Т-лимф., АПК), нарушение их функции (ВИЧ, герпесвирусы) и в конечном итоге развитие ИДС.

5. Стимуляция иммунокомпетентных кл.к продукции иммуносупрессивных факторов.

6. Ингибиция биосинтеза наиболее важных цитокинов (ретровирусы, вирус Эпштейна-Барр).

7. Индукция аутоиммунных и аллергических процессов (вирусы гепатита В, герпеса, цитомегалии, Эпштейна-Барр, аденовирусы,)

8. Ингибиция активации СК.

Ускользание вируса от защитных факторов приводит к его персистенции в кл. и создает возможность для формирования латентной инф.

129. Принципы этиологической диагностики вирусных инфекций. Экспресс-методы.

Серологический метод диагностики: принципы проведения, критерии постановки диагноза. Реакция торможения гемагглютинации/гемадсорбции: механизмы, способы постановки, учёт, применение. Реакция нейтрализации: механизмы, способы постановки, учёт, применение.

В основе лабораторной диагностики вирусных инфекций лежат 4 группы методов:

1 группа – обнаружение возбудителя или его компонентов непосредственно в клиническом материале, взятом от больного, и получение ответа через несколько часов (быстрая; экспресс-диагностика).

2 группа — выделение вируса из клинического материала, его индикация и идентификация (вирусологическая диагностика).В большинстве случаев конц. вируса в материале недостаточна. В этих случаях используют вирусологическую диагностику. Эта группа методов требует продолжительного времени, трудоемка, часто является ретроспективной. Однако она является необходимой для инф., вызванных новыми типами вируса, или когда невозможно провести диагностику др.методами.

Методы экспресс-диагностики распространенных вирусных инфекций

Вирусы	Инфекция	Материал для исследования	Сроки забора материала	Методы экспресс- диагностики
Аденовирусы	Аденовирусная инфекция	Отделяемое носоглотки, конъюнктивы, кровь, кал, моча	Первые 7 дней болезни	РИФ, молекулярная гибридизация (МГ), ЭМ, ИФА, РИА, ПЦР
Парагриппа, РС-вирус	ОРВИ	Отделяемое носоглотки	Первые 35 дней болезни	РИФ, ИФА, МГ, ПЦР
Гриппа	Грипп	Отделяемое носоглотки	Первые 35 дней болезни	РИФ, ИФА, РИА, ЭМ, МГ, ПЦР, ИБ
Риновирусы	ОРВИ	Отделяемое носоглотки	Первые 35 дней болезни	РИФ, МГ, ПЦР
Простого герпеса	Herpes simplex	Содержимое везикулы	Первые 12 дней после появления сыпи	РИФ, ИЭМ, ИФА, РИА, МГ, ПЦР, ИБ
Ветряной оспы и опоясывающего герпеса	Ветряная оспа, опоясывающий герпес	Содержимое везикулы	Первые 7 дней после появления сыпи	ИФА, ИФ, ИЭМ, РИА, МГ, ПЦР

Вирусы	Инфекция	Материал для исследования	Сроки забора материала	Методы экспресс- диагностики
Цитомегалии	Цитомегаловирусная инфекция	Моча, слюна, кровь	Весь период заболевания	ЭМ, микроскопия мазков-отпечатков, МГ, РИФ, выявление IgM, РИА, ПЦР
Ротавирусы	Острый гастроэнтерит	Фекалии	Первые 35 дней болезни	ЭМ, ИЭМ, ИФА, РИА, МГ, ПЦР, электрофорез РНК в ПААГ
Энтеровирусы	Серозный менингит, ОРВИ, ОКИ, полиомиелит	Фекалии, кровь, отделяемое носоглотки	Весь период заболевания	РИФ, РИА, МГ, ПЦР
Гепатита А	Гепатит А	Фекалии, кровь	Первые 7-10 дней болезни	ИЭМ, ИФА, РИА, выявление IgM
Гепатита В	Гепатит В	Кровь, биопсийный материал	Весь период заболевания	ИФА, РИА, РОПГА, МГ, ПЦР, ВИЭФ
Гепатита С	Гепатит С	Кровь, биопсийный материал	Весь период заболевания	ИФА, МГ, ПЦР
ВИЧ	ВИЧ-инфекция	Кровь	Весь период заболевания	ИФА, ИБ, ПЦР

Материалом исследования при заболеваниях, сопровождающихся диареей или др. расстройствами жкт (гепатит А, рота- и энтеровирусные инфекции), являются свежие порции фекалий. При заболеваниях дыхат. системы (грипп, парагрипп, аденовирусная инф.) материал получают путем аспирации слизи, смывов, мазки из носоглотки. При наличии везикулярной сыпи (герпес) материал для исследования ж-ть, аспирированная иглой из везикул. При петехиальной и макуло-папулёзной сыпи —пробы слизи из носоглотки, фекалии. При подозрении на нейровирусные инф. (полиомиелит, арбовирусные инф.) следует забирать слизь из носоглотки, фекалии и спинномозговую ж-ть. Для диагностики эпидемического паротита и бешенства материалом служит слюна. При подозрении на цитомегало- и паповавирусные инф.материал- моча. Выделение вируса из кр. при подозрении на инф., вызванные арбовирусами, вирусами герпеса. Биопсия мозга может быть проведена при диагностике герпетического энцефалита, ПСПЭ, прогрессирующего краснушного панэнцефалита, болезни Крейтцфельдта-Якоба, лейкоспонгиоза.

Препараты слизи из носоглотки или фекалии помещаются в среду для транспортировки, состоящую из физ. р-ра с добавлением а\б и небольшого кол-ва сыворотки животных. Материалы хранятся при t 4С не боле 48 часов. Более длительное хранение требует температуры –70С.

Индикация вирусов в культуре клпроводится по ЦПД, РИФ, РГА, РГАдс. Многие энтеровирусы вызывают раннее ЦПД (через несколько часов). Цитомегаловирусы, аденовирусы, вирус краснухи вызывают ЦПД через несколько недель, а иногда необходимо прибегать к получению субкультуры. Присутствие синцития свидетельствует о наличии таких вирусов, как РС, кори, эпидемического паротита, герпесвирусов.

Идентификация вирусов проводится с помощью серологических методов( РТГА - ингибирование специфическими Ат феномена гемагглютинации (склеивания эритроцитов гемагглютининами вируса), РН, РТГАдс, используются только при вирусных инфекциях. РСК, РПГА, ИФА, РИА, ИФ, РП используются для диагностики как вирусных инф., так и инф, вызванных другими возбудителями). На схемах 2 и 3 представлена вирусологическая диагностика ОРВИ и кишечных инфекций.

3 группа — серологическая диагностика вирусных инфекций.

В большинстве случаев для серологической диагностики требуются парные сыворотки, взятые в острой фазе заболевания и спустя 24 недели. Обнаружение четырехкратного и более повышения титра антител принято рассматривать в качестве диагностического признака острой вирусной инфекции.

Слизь из носоглотки, обработанная антибиотиками

Заражение куриных эмбрионов

Заражение мышей-сосунков

РГА

гибель, специфические поражения ХАО

параличи, гибель

РСК, РТГА

РИФ, РН

Вирусы Коксаки, герпеса

Вирусы гриппа

Вирусы герпеса

Заражение культур клеток

ЦПД может отсутствовать

Образование синцития

Аденовирусный тип ЦПД

Пикорнавирусный тип ЦПД

Герпетичес-кий тип ЦПД

интерференция

РТГАдс

РИФ, РН, РСК, МГ, ПЦР

РИФ, РН, РСК, РТГА, МГ, ПЦР

РСК, РН по цветной пробе, МГ, ПЦР

РИФ, РН, МГ, ПЦР

РИФ, ПЦР

РИФ, РН, РТГА, РТГАдс, ПЦР

Вирус краснухи

Вирусы гриппа, парагриппа, эпидпаротита

РС-вирус, кори, парагриппа

Аденовирусы

Энтеровирусы, риновирусы

Вирусы простого герпеса, цитомегалии

			Суспензия фекалий, обработанная антибиотиками, осветленная центрифугированием
	Заражение культур клеток													Заражение мышей
Пикорнавирусный тип ЦПД					Реовирусный тип ЦПД				Аденовирусный тип ЦПД					Параличи, гибель
РСК, РН по цветной пробе, ПЦР					РИФ, РН, РТГА, МГ, ПЦР				РТГА, РСК, РН, МГ, ПЦР					РН, РСК, МГ, ПЦР
Энтеровирусы					Ротавирусы				Аденовирусы					Коксаки А, В, Ротавирусы

Схема 3. Выделение вирусов из фекалий, их индикация и идентификация при кишечных вирусных инфекциях

4 группа — молекулярно-биологические методы индикации, идентификации и клонирования вирусов. Проводятся с целью выявления вирусспецифических фрагментов генома вирусов в материале.

Молекулярно-биологическая индикация вирусов в биологическом материале (дот блоттинг, in sinu гибридизация, сэндвич гибридизация):

• Методы молекулярной гибридизации (метод микрогенов). Проводятся с целью выявления вирусспецифических фрагментов генома вируса. Хар-ся высокой чувствительностью и специфичностью. Используются для выявления цитомегаловирусов, вирусов герпеса, вирусов гепатита.

• Полимеразная цепная реакция (ПЦР): проведение индикации вирусов, идентификации, дифференциации с родственными инф.агентами, генотипирование изолятов вирусов и клонирование фрагментов их генома.

• Вестерн-блоттинг — основан на выявлении циркулирующих в крови специфических АТ к АГ вируса.

• Определение инфицированных вирусом клеток методом проточной цитофлюориметрии. Используется при ВИЧ-инфекции, инфекционном мононулеозе, гепатите С, цитомегаловирусной инфекции.