91.Принцеп будови люмінесцентного мікроскопа.

Люминесцентные микроскопы

Некоторые вещества под воздействием энергии возбуждения способны излучать свечение — это называется явлением люминесценции. Для исследования объектов, обладающих данным свойством, используют люминесцентные микроскопы — они находят применение в таких областях наук, как биология, цитология, генетика, иммунология (иммунохимические, иммунологические, иммуноморфологические и иммуногенетические анализы) и многих других для исследования различных люминесцирующих материалов. Являются незаменимыми при диагностике различных инфекций антигенного состава, например, вирусных и бактериальных.

Среди преимуществ люминесцентных микроскопов стоит отметить: возможность наблюдения как прозрачных, так и непрозрачных веществ, а также поверхностей темных объектов;получение контрастного изображения исследуемого объекта на темном фоне. Принцип действия люминесцентных микроскопов заключается в получении изображения посредством светового потока свечения самого объекта исследования. Свет, прошедший сквозь возбуждающий светофильтр в устройстве микроскопа, вызывает свечение объекта, данный световой поток затем проходит через запирающий светофильтр, где отсекается возбуждающее излучение, и остается только люминесцентный, то есть световой поток свечения объекта.

Устройство люминесцентных микроскопов «Альтами» подобно конструкции металлографических (работающих по методу светлого поля в отраженном свете*), но есть несколько функциональных различий: источником света здесь выступает ртутная лампа вместо галогенной;

имеются блоки с уже упоминаемыми светофильтрами и дихроичным зеркалом. Дихроичное (полупрозрачное) зеркало в осветительной системе микроскопа в данном случае нужно для того, чтобы отражать световой поток от источника света, направляя его в объектив, который освещает объект, и пропускать свет, затем отраженный от объекта и вновь прошедший через объектив. Существует несколько способов крепления люминесцентных блоков: 3-х позиционное устройство с горизонтальным перемещением (револьверное устройство для 5 блоков, из которых 1 пустой Что касается объективов, то люминесцентные (PL FL) ставятся в комплекте с обычными (PL) объективами проходящего и отраженного света. Чаще всего используют объектив с 10 или с 40-кратным увеличением, так как для 100X требуется иммерсионное масло, которое достаточно быстро используется. Для нацеливания на объект интереса используется объектив 4X.

Люминесцентная микроскопия.

Люминесцентная микроскопия (лат. Lumen, luminis свет; греч. Micros малый + skopeo рассматривать, исследовать) – метод микроскопии, позволяющий наблюдать первичную или вторичную люминесценцию микроорганизмов, клеток, тканей или отдельных структур, входящих в их состав.

Цвет люминесценции, т.е. длина волны излучаемого света зависит от химической структуры и от физико–химического состояния микроскопируемого объекта, что и обусловливает возможность использования л.м. в целях микробиологической и цитологической диагностики, для дифференцирования отдельных компонентов клеток. Первичная люминесценция присуща ряду биологически активных веществ, таких, как ароматические аминокислоты, порфирины, хлорофилл, витамины А, В2, В1 , некоторые антибиотики (тетрациклин) и химиотерапевтические вещества (акрихин, риванол). Вторичная, или наведённая, люминесценция возникает в результате обработки микроскопируемых объектов флюоресцирующими красителями – флюорохромами. Некоторые из этих красителей диффузно распределяются в клетках, другие избирательно связываются с определёнными структурами клеток или даже с определёнными химическими веществами. Эта способность флюорохромов к избирательному окрашиванию позволяет проводить люминесцентно – цитологический и люминесцентно – цитохимический анализ.

Для проведения люминесцентной микроскопии используются либо специальные люминесцентные микроскопы, либо приставки к обычным биологическим микроскопам, позволяющие использовать их для наблюдения люминесценции микрообъектов.

Люминесцентный микроскоп снабжен мощным источником освещения с большой поверхностной яркостью, максимум излучения которого находится в коротковолновой области видимого спектра, системой светофильтров, а также интерференционной светоделительной пластинкой, применяемой при возбуждении люминесценции падающим светом. Эта система возбуждения люминесценции падающим светом через опак – иллюминатор имеет ряд преимуществ:

интерференционная светоделительная пластинка с нанесёнными на неё слоями диэлектриков избирательно отражает на препарат более 90% света, возбуждающего люминесценцию, и почти полностью пропускает более длинноволновый свет люминесценции, что позволяет увеличить яркость люминесценции;

объектив микроскопа служит одновременно конденсором осветительной системы; поэтому при использовании высокоапертурных иммерсионных объективов с большим увеличением освещённость препарата и соответственно яркость люминесценции возрастают пропорционально четвёртой степени апертуры объектива;

люминесцентную микроскопию можно сочетать с фазово-контрастной и интерференционной при освещении снизу через конденсор микроскопа.

Источниками освещения для люминесцентного микроскопа чаще являются ртутно-кварцевые лампы сверхвысокого давления, а также лампы накаливания: ксеноновые и кварцево-галогенные.

Для возбуждения люминесценции при люминесцентной микроскопии обычно используют длинноволновую ультрафиолетовую, сине-фиолетовую, а иногда и зелёную область спектра, в люминесцентном микроскопе применяют обычно стеклянную оптику и обычные предметные и покровные стёкла, пропускающие излучение в этой части спектра и не обладающие собственной люминесценцией. Иммерсионные и заключающие среды также должны соответствовать этим требованиям. В качестве заключающих сред для препаратов могут быть использованы буферный раствор глицерина, а также нелюминесцирующие полимеры (полистирол, поливиниловый спирт).

92.Вказати загальні подібності та відміності хромосом і генів про – та еукаріот.