Вопрос10 Методы генетического анализа. Днк-гибридизация. Пцр, их место в лабораторной диагностике

К осн. методам Г. а. относятся: селекционный метод, с помощью к-рого осуществляют подбор или создание исходного материала, подвергающегося дальнейшему анализу (напр., Г. Мендель, к-рый по существу является основоположником Г. а., начинал свою работу с получения константных — гомозиготных — форм гороха путём самоопыления); гибридологический метод, представляющий собой систему спец. скрещиваний и учёта их результатов (см. Гибридологический анализ}; цитогенетический метод, заключающийся в цитологич. анализе генетич. структур и явлений на основе гибридологич. анализа с целью сопоставления генетич. явлений со структурой и поведением хромосом и их участков (анализ хромосомных и геномных мутаций, построение цитологич. карт хромосом, цитохимич. изучение активности генов и т. п.). Частный случай цитогенетич. метода — геномный анализ. На основе популяционного метода изучают генетич. структуру популяций разл. организмов: количественно оценивают распределение особей разных генотипов в популяции, анализируют динамику генетич. структуры популяций под действием разл. факторов (при этом используют создание модельных популяций). Молекулярно-генетич. метод представляет собой биохимич. и физ.-химич. изучение структуры и функции генетич. материала и направлен на выяснение этапов пути «ген-»признак» и механизмов взаимодействия разл. молекул на этом пути. Мутационный метод позволяет (на основе всестороннего анализа мутаций) установить особенности, закономерности и механизмы мутагенеза, помогает в изучении структуры и функции генов. Особое значение мутац. метод приобретает при работе с организмами, размножающимися бесполым путём, и в генетике человека, где возможности гибридологич. анализа крайне затруднены. Близнецовый метод, заключающийся в анализе и сравнении изменчивости признаков в пределах разл. групп близнецов, позволяет оценить относит, роль генотипа и внеш. условий в наблюдаемой изменчивости. Особенно важен этот метод при работе ' малоплодовитыми организмами, имеющими поздние сроки наступления половой зрелости (напр., кр. рог. скот), а также в генетике человека. В Г. а. используют и мн. др. методы (онтогенетический, иммуногенетический, математический и т. д.),

• Гибридизация ДНК, гибридизация нуклеиновых кислот — соединение in vitro комплементарных одноцепочечных нуклеиновых кислот в одну молекулу. При полной комплементарности объединение происходит легко и быстро, а в случае частичной некомплементарности слияние цепочек замедляется, что позволяет оценить степень комплементарности. Возможна гибридизация ДНК-ДНК и ДНК-РНК Двухцепочечную ДНК разогревают в соответствующем буфере. Из-за изменения внешних условий, водородные связи между комплементарными азотистыми основаниями становятся термодинамически невыгодными и цепочки расходятся.

• Препарат денатурированных ДНК смешивают с другой денатурированной ДНК.

• Препараты медленно охлаждают, при этом одноцепочечные ДНК гибридизуются друг на друга (образуются водородные связи между комплементарными основаниями), при этом образуется «гибридная» молекула ДНК.

Анализ скорости отжига ( = гибридизации) одноцепочечных ДНК позволяет оценивать сходства и различия в последовательностях ДНК между видами