- •Гомель 2010 г.
- •Глава 1 Обзор литературы
- •1.1Helicobacter pylori-что это такое?
- •1.2Факторы вирулентности:
- •Глава 2 Методы диагностики Helicobacter pylori
- •2.1 Методы диагностики Helicobacter pylori :
- •Глава 3 Материалы и методы исследования
- •Глава 4 Результаты собственных исследований
- •Глава 1
- •1.1 Helicobacter pylori что это такое?
- •1.2 Факторы вирулентности:
- •Глава 2
- •2.1 Методы диагностики Helicobacter pylori :
- •Глава 3
- •3.1 Материалы исследования:
- •3.2 Методы исследования:
- •3.2.2 Необходимое оборудование и расходные материалы:
- •1 Этап - выделение днк из биопроб:
- •2 Этап - проведение пцр (амплификация):
- •3 Этап - детекция продуктов амплификации:
- •1. Комплект для пробоподготовки (выделения днк)
- •2. Комплекты для проведения пцр (амплификации)
- •3. Комплект для детекции продуктов амплификации
- •3.3 Проведение исследования
- •3.3.1 Взятие,доставка и хранение материала:
- •3.3.2 Выделение днк из биопроб:
- •3.3.3 Проведение пцр(амплификация):
- •3.4 Детекция продуктов амплификации:
- •3.5 Анализ результатов:
- •3.6 Выявление гена CagA h. Pylori
- •Глава 4
- •4.1Таблица.6 Эндоскопические и гистологические проявления инфекции h. Pylori у носителей:
- •4.2 Анализ полученных материалов эндоскопического исследования
- •4.3 Анализ полученных материалов эндоскопического исследования
2 Этап - проведение пцр (амплификация):
- ПЦР-бокс с УФ-лампой;
- программируемый термостат амплификатор;
- микроцентрифуга-вортекс 1,5-3тыс.об/мин;
- пипетка-дозатор переменного объема 5 - 50 мкл для работы с биопробами;
- пипетки-дозаторы переменного объема ( 0,5 - 10; 5-50; 20-200; 100-1000 мкл) для приготовления рабочей смеси реагентов ;
- одноразовые полипропиленовые микропробирки 0,5 мл (или 0,2 мл) для амплификации;
- одноразовые наконечники до 200 мкл и до 1000 мкл для приготовления рабочей смеси реагентов ;
- одноразовые наконечники с фильтром (аэрозольным барьером) до 100 или до 200 мкл для биопроб;
- штатив для пробирок 0,5 мл (или 0,2 мл) «рабочее место»;
- штативы для наконечников 200 мкл;
- одноразовые перчатки;
- емкость для сброса использованных наконечников;
- холодильник с морозильной камерой для хранения исходных реагентов;
- комплект реагентов для проведения ПЦР (индивидуален для каждого возбудителя);
3 Этап - детекция продуктов амплификации:
- камера для горизонтального электрофореза;
- источник постоянного тока с напряжением не менее 150 В;
- УФ-трансиллюминатор;
- СВЧ-печь для плавления агарозы;
- технические весы для взвешивания агарозы;
- аквадистиллятор;
- видеосистема для документирования гель-электрофореграмм со светозащитным кабинетом или тубусом, подключенная к персональному компьютеру;
- пипетка-дозатор переменного объема 5 - 50 мкл для нанесения образцов на гель;
- пипетка-дозатор переменного объема 100-1000 мкл;
- одноразовые наконечники до 200 мкл для нанесения образцов;
- одноразовые наконечники до 1000 мкл;
- штатив для пробирок 0,5 мл (или 0,2 мл) «рабочее место»;
- агароза, раствор бромистого этидия, 50хТАЕ буфер для приготовления геля и проведения электрофореза (или готовый комплект реагентов для электрофоретической детекции);
- пластиковая емкость большого объема для дезактивации буфера и гелей;
СОСТАВ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ для ПЦР
В состав набора реагентов входят три комплекта :
1. Комплект для пробоподготовки (выделения днк)
« Набор для выделения ДНК из биоптата для ХЕЛИКОПОЛ» (кат № 020104 ) (на 50 образцов):
1. Лизирующий раствор..................................................... 5 мл
2. Раствор I 25 мл
3. Раствор II 10 мл
3. Раствор III 100 мл
4. Cорбент 1 мл
5. ТЕ буфер 2.5 мл
2. Комплекты для проведения пцр (амплификации)
Рассчитаны на проведение анализа 50 исследуемых образцов, 5 положительных
контрольных образцов и 5 отрицательных контрольных образцов.
ХЕЛИКОПОЛ (кат № 010111):
Реакционная смесь 150 мкл
Taq-полимераза (5 ед/мкл) 15 мкл
Разбавитель 1 мл
Минеральное масло 1 мл
ДНК контрольная H.pylori 25 мкл
3. Комплект для детекции продуктов амплификации
Для детекции продуктов амплификации можно использовать как готовые комплекты, так и отдельные реагенты.
Готовые комплекты:
Комплект №1 (кат №030106) (на 100 –150 образцов)
агароза-2х2г, 50хТАЕ буфер-25 мл, раствор бромистого этидия-30мкл
Комплект №2 (кат №030107) (на 120 образцов)
2% агарозный гель (40 лунок) –3шт, 50хТАЕ буфер-25 мл
Отдельные реагенты:
- Агароза (100г/уп; 2г/уп) (кат №030101)
- Раствор бромистого этидия (1мл/уп) (кат №030104)
- 50хТАЕ буфер (200 мл/уп; 120мл/уп) (кат №030102)
- 2% агарозный гель для электрофореза ( 40 лунок)(1шт/уп; 5шт/уп)(кат №030108)
