Стерилизация

Для стерилизации жидкости при Пастере применяли два метода, которые используют и в наше время. Было обнаружено, что котел с давлением, который изобрел Денис Папин (1647-1712) в 1679 году в Англии, является подходящим аппаратом для убивания терморезистентных спор. Котел Папина стал прообразом автоклава.

С 1871 года стерилизацию проводили также с помощью бактериальных фильтров. В 1884 году Шарль Шамберлен (1851-1908) в Париже предложил аппарат для фильтрации в виде свечи из необработанного фарфора. В 1891 году Г. Нордтмайер ввел фильтр из диатомовых отложений (кизельгура). Этот фильтр в честь обладателя этих диатомовых отложений был назван фильтром Бергфельда. Применение мембранных фильтров происходит от коллоидохимических иследований. Используемые в настоящее время «геттингенские мембранные фильтры» являются производными целлюлозы и были предложены Зигмонди и Бахманом в 1918 году. Это многослойные пористые мембранные фильтры, общество по созданию которых было основано в городе Геттингене.

Методы окраски микроорганизмов

Методы окраски бактерий связаны с именем Коха. Эти методы взяты от ботаников. Герман Гоффман (1819-1891) использовал в 1869 году кармин для окраски бактерий. Анилиновый краситель фуксин, открытый в Англии Перкином в 1856 году, был применен для окраски бактерий в 1875 году Карлом Вейгертом (1845-1904). Метиленовый синий был использован для окраски бактерий в 1881 году Паулем Эрлихом. Тепловая фиксация клеток на предметном стекле и окраска метиленовым синим были заимствованы Кохом у Эрлиха.

Дифференцирующую окраску генциан-виолетом предложил датский фармаколог и патолог Ганс Христиан Грам (1853-1938) в лаборатории Фридландера в Берлине в 1884 году. В последующие годы были разработаны методы окраски бактерий, применяющиеся и сегодня: техника окраски для кислотоустойчивых палочек Циля - Нильсона (1883) и окраска жгутиков по Лефлёру (1890). Позднее были разработаны методы окраски полярных телец коринебактерий, гранул, окрашивание Суданом метахроматических гранул, бактериальных капсул, ядер и других структур.

Выделение чистой культуры

Известно, что при получении культур строгих анаэробов возникают большие трудности. Для выделения бактерий, не чувствительных к кислороду, например бактерий, образующих споры, можно использовать пластинки Коха. Для создания условий роста анаэробов был предложен ряд приемов. Например, кислород в пробирках при инокуляции поглощали пирогаллолом. На чашках Петри бактерии выращивали в закрытых сосудах (эксикаторах, емкостях Витта), в которых воздух заменяли азотом. Остаточный кислород удаляли добавлением пирогаллола. Другими поглотителями кислорода могут быть прорастающие зерна злаков. Использовали также примесь водорода к газовой атмосфере с добавкой платинового катализатора. При выделении высокочувствительных к кислороду, например, спорообразующих бактерий, многочисленных метанообразующих бактерий, требуются приемы, препятствующие контакту с кислородом во время посева петлей на поверхность агара.

Р. Хангейт разработал хорошо стандартизированные методы, проводимые под непрерывной струей азота, проходящей над раскаленной медью. Методы Хайгейта продвинули исследования дальше и быстрее, чем многие смелые концепции. Некоторые его методические улучшения оказались настолько простыми, что такие исследователи, как А.де Бари, назвали их «ловкостью рук» и считали не заслуживающими специального описания. Однако методы, описанные Кохом, тоже могут считаться «ловкостью рук».

Принципы, известные как постулаты Коха, не подлежат сомнению для микробиологов. В основе их лежит триада экспериментального доказательства природы возбудителя инфекции: