11. Гуморальный иммунный ответ, этапы. Отличительные черты первичного и вторичного иммунного ответа.

Гуморальный иммунный ответ - комплексная кооперативная многокомпонентная реакция организма, которая индуцируется антигеном и приводит к выработке специфических к антигену антител, образованию иммунных комплексов и элиминации антигена. Реализуется посредством В-системы Лф при участии Т-лф. Контролируется ККМ, развивается на растворимые агенты - белки, ЛПС, экзотоксины, на внеклеточных паразитов.

Динамика: Распознавание Аг. Переработка Аг в АПК и презентация его CD4+ Т-лимфоцитам. Активация Т-Лф, продукция цитокинов. Активация, пролиферация и дифференцировка В-Лф в плазматические клетки и В-Лф памяти. Синтез антител и элиминация Аг : Лизис при активации С. Фагоцитоз.

Ответ иммунный первичный (ПИО) — реакция иммунной системы организма на первое поступление (введение) антигена, вакцины. Отличается непродолжительностью и низкой специфичностью. Сопровождается биосинтезом преимущественно специфических антител IgM класса. При этом антитела IgM и IgA классов продуцируются значительно быстрее, нежели антитела IgG изотипа. Этот тип иммунитета можно рассматривать как экстренное реагирование иммунной системы на воздействие инфекции. В динамике его развития различают три фазы — индуктивную (латентную), продуктивную и затухания. Первая длится 6-7 дней. В этот период антиген подвергается переработке в фагоцитарных и других АПК и презентируется клонам Т- и В- лимфоцитов. Последние затем трансформируются в лимфобласты, пролиферируют, дифференцируются и превращаются в плазматические клетки, эффекторные и регуляторные Т-клетки, синтезирующие антитела и клетки памяти, специфичные к данному антигену. Во время продуктивной фазы осуществляются биосинтез антигенспецифических ан­тител, цитокинов и накопление их в биологических жидкостях (в сыворотке крови, слюне, секретах, цереброспинальной жидкости). При этом уровень специфических антител возрастает экспоненциально и после того как он достигнет максимума, формируется плато. Данный процесс длится от 4 дней до 4 недель. Обычно его пик приходится на 14—21-й день. Максимальное продуцирование антител к белковым антигенам (анатоксинам) длится 3 недели. После этого наступает фаза затухания, а про­дуктивный период постепенно завершается. Причем процесс снижения уровеня антител вначале идет быстро, затем замедляется.

Ответ иммунный вторичный (ВИО) — иммунный ответ на повторное введение антигена в организм. В его основе лежат механизмы иммунологической памяти и прогрессивная клональная селекция антигенспецифических клонов В- и Г- лимфоцитов. В отличие от первичного, возникает на действие антигена в меньшей дозе, развивается быстрее (короче индуктивная фаза) и, как правило, интенсивнее. Кроме того, он более специфичный (синтезируются преимущественно антитела IgG), более напряженный и более зрелый (выше аффинность антител); а вызываемый им протективный эффект сохраняется дольше. Причем динамика процесса антителообразования также носит экспоненциальный характер, но развивается он быстрее, а затухает значительно медленнее. Повторное введение антигена в, организм с высоким уровнем антител к нему может не дать эффекта усиления иммунного ответа. Существует два варианта ГИО. Если ответ происходит на Т - независимые антигены, то это т. н. простой ответ, он возможен потому, что некоторые антигены способны сами активировать Т-лимфоциты. В этом случае синтез IgM не сопровождается образованием клеток памяти. В случае, если ответ формируется в ответ на Т- зависимые антигены, происходит кооперация Т- и В-лимфоцитов. Выделяют следующие стадии: распознавание антигена; презентация антигена - макрофаг поглощает антиген, расщепляет, соединяет с белками МНС I и МКС II и переносит на мембрану; передача информации на Т- хелпер; бласттрансформация В- лимфоцитов, дифференцировка бластов в плазмациты и В- клетки памати; синтез антител и элиминация антигена.

Функция антител: активация системы комплемента, нейтрализация токсинов, опсонизация антигенов, преципитация мелких антигенов.

12. В-лимфоциты. Характеристика. Основные маркёры. В-клеточный-рецептор. Методы определения содержании и функциональной активности В-лммфоцитов.

В-лимфоциты называются так потому, что они впервые выявлены у птиц в специальном центральном органе иммунитета, который называется "сумка Фабрициуса" (bursa of Fabricius) и в котором они проходят стадию созревания. У животных данный орган отсутствует, и ранние стадии созревания В-лимфоциты проходят в ККМ.

В-лимфоцитами являются лимфоциты, способные синтезировать антитела. Большинство образо­ванных в ККМ пре-В- лимфоцитов (> 95%) погибают там же в результате процесса селекции клеток. Зрелые В-лимфоциты мигрируют в кровь, а затем во вторичные лимфоидные органы (селезенку, лимфатические узлы, лимфоидные ткани ЖКТ и слизистых). Они имеют антигенспецифический В-клеточкый рецептор (ВКР) в виде мембраносвязанных мо­лекул антител, а также ряд поверхностных CD антигенов и рецепторов. В-лимфоциты могут узнавать нативный антиген в свободном состоянии. Взаимодействие антигена с В-клеточным антигенспецифическим рецептором приводит к активации В-лимфоцитов и их развитию (дифференцировке) в эффекторные клетки, специализирующиеся в биосинтезе антител.

Большинство В-лимфоцитов периферической крови экспрессирует на поверхности клетки два изотипа им­муноглобулинов- IgM и IgD. Очень небольшое количество циркулирующих клеток экспрессирует иммуноглобулины G, А или Е изотопов.

Поверхностные маркеры В-Лф:

1. Молекулы, вовлеченные в распознавание антигена и сигнальные процессы: а) BCR: поверхностные иммуноглобулины (собственно BCR); CD79 альфа и бета (проводят сигнал о распознавании антигена); б) Ко-рецепторы: CD21 – CRII (для С3d); CD19; CD81 (TAPA); в) Регулятор активности BCR: CD45 - мембран-ассоциированная фосфатаза; г) Протектор/переключатель изотипа: CD40.

2. Молекулы контактного взаимодействия и презентации: а) Адгезия: CD72 – CD5; CD54 (ICAM1) - LFA1(CD11a/CD18); CD58(LFA3) – CD2; б) Ко-стимуляция В-лимфоцитов: CD40 – CD154 (CD40L); в) Ко-стимуляция Т-лимфоцитов: CD80, CD86 – CD28, CTLA; г) Рестрикция: Молекулы ГКГС II типа – CD4.

3. Молекулы дистантного взаимодействия: а) рецептор для ИЛ2 – CD25, CD122, CD132 б) рецептор для ИЛ4 – CD124, CD132 в) рецептор для ИЛ5 – CD125, CD131 г) рецептор для ИЛ6 – CD126, CD130 д) рецептор для ИФН-гамма – CD119 е) рецептор для ИЛ1 – CD121. ж) рецептор для ФНО-альфа – CD120.

4. Маркеры активации: а) CD25, а также другие высокоаффинные рецепторы к цитокинам б) CD69 – передача сигнала о пролиферации в) CD71 – рецептор для трансферрина г) CD23 – низкоаффинный рецептор для Fc фрагмента IgE II типа, необходим для клеточного деления. д) Гиперэкспрессия молекул ГКГС II типа е) CD30 – передача сигнала о пролиферации/ апоптозе (лиганд – CD153).

5. Другие: CD32 – рецептор к Fc фрагменту IgG II типа – при связывании передает отрицательный сигнал (угнетает активацию). CD5 – молекула из семейства скавенжер-подобных рецепторов. Ассоциирована с ВКР, возможно, помогает распознавать/активирует В клетки 1 типа. CD49 – опосредует взаимодействие с внеклеточным матриксом. CD24 – участвует в костимуляции и активации В лимфоцитов. CD35 – рецептор для комплемента 1 типа (С3в).

CD антигены выполняют три основные функции: а) рецепция молекул цитокинов и адгезинов; б) передача внутриклеточного сигнала; в) осуществление клеточно-клеточных взаимодействий.

Антигенраспознающий В-клеточный рецептор В-линфоцитов (BcR - англ. B-cel I Receptor) построен из молекулы мембранного иммуноглобулина и двух молекул CD79. BcR имеет трансмембранные и внутрицитоплазматические сегменты, передающие внутриклеточные сигналы. Мембранные иммуноглобулины представлены мономерными IgМ или IgD.

В-лим­фоциты человека способны связывать эритроциты мыши и образовывать с ними розетки (Вм-розетки), а также формировать розетки с эритроцитами, сенсибилизированными молекулами антител (IgG) и молекулами СЗб фрагмента системы комплемента, что используется в лабораторной практике. Эти свойства совместно с экспрессией CD 5 молекул позволяют выявить субпопуляцию В-лимфоцитов.

Исследование количества и функционального состояния В-лимфоцитов В-клетки обнаруживаются в периферической крови по их рецепторному аппарату, а именно:

а) по наличию рецепторов к иммуноглобулинам и 3-ей фракции комплемента - реакция ЕАС-розеткообразования; Реакция ЕАС-розеткообразования ставится в 2 этапа: вначале

готовят реагент, состоящий из эритроцитов быка, антител к ним и комплемента, затем этот образовавшийся комплекс добавляют к лимфоцитамкрови человека. Образуется розетка, которая внешне ничем не отличается от Е-розеток, но метод получения указывает на выявление именноВ-лимфоцитов.

б) по наличию иммуноглобулиновых рецепторов - реакция иммунофлюоресценця; Реакция иммунофлюоресценции позволяет обнаружить на поверхности В-лимфоцита иммуноглобулиновые рецепторы. Для этого используются антиглобулиновые сыворотки, меченые люминофорами.

в) по наличию рецепторов к эритроцитам мыши - реакция МЕ-розеткообразования. Реакция роэеткообразования с мышиными эритроцитами появляется в результате смешивания последних с лимфоцитами периферической крови.

Функциональная характеристика В-лимфоцитов и количества иммуноглобулинов различных классов. Чаще других используется метод радиальной иммунодиффузии в агаре: на стеклянную пластину наливают расплавленный агар, содержаций антитела к даннному классу иммуноглобулинов. В агаре выбивают лунки, в которые вносят образцы изучаемых сывороток. В результате иммунопреципитации, образуются радиальные полоски, диаметр которых зависит от концентрации соответствующего иммуноглобулина. -Определение антител к аутоантигенам или к микробам нормальной микрофлоры.

-Определение титра специфических антител, вырабатывающихся в организме человека после иммунизации его вакцинами.