Лабораторная работа №8 определение содержания редуцирующих сахаров
К редуцирующим сахарам относятся углеводы, содержащие карбонильную группу в свободном состоянии (глюкоза, фруктоза, лактоза и др.). Определение их содержания основано на взаимодействии с гексацианоферратом (III) калия в щелочной среде:
C6H5(OH)5CHO + 2 [Fe(CN)6]3- + H2O → C6H5(OH)5COOH + 2 [Fe(CN)6]4- + 2H+
Гексацианоферрат (III) калия, раствор которого окрашен в желтый цвет, после восстановления обесцвечивается с образованием гексацианоферрата (II) калия. С повышением содержания редуцирующих сахаров в анализируемом продукте оптическая плотность фотометрируемого раствора уменьшается.
Реактивы: раствор uексацианоферрата (III) калия, стандартный раствор глюкозы.
Оборудование: весы, водяная баня, колбы, фотоэлектроколориметр.
Порядок выполнения работы.
8.1. Построение градуировочного графика
В 6 колб вместимостью 100 мл пипеткой вводят по 25 мл раствора гексацианоферрата (III) калия, последовательно добавляют 7,0; 7,5; 8,0; 8,5; 9,0; 9,5 мл стандартного раствора глюкозы. Объем доводят до 35 мл, для этого добавляют соответственно 3,0; 2,5; 2,0; 1,5; 1,0; 0,5 мл воды и перемешивают. Полученные растворы содержат соответственно 14; 15; 16; 17; 18 и 19 мг глюкозы. Растворы в колбах нагревают до кипения, кипятят точно 1 мин и сразу охлаждают струей водопроводной воды.
Чтобы определить максимум светопоглощения, для 2…3 растворов (по заданию преподавателя) находят оптическую плотность в кюветах с длиной слоя 1 см при длине волны от 360 до 520 нм через 40 нм. Контролем является дистиллированная вода. В каждой пробе измерение проводят 3 раза.
По средним значениям строят график в координатах: оптическая плотность раствора – длина волны, нм. По графику определяют максимум светопоглощения (длина волны, при которой наблюдается максимальное значение оптической плотности). Затем при оптимальной длине волны проводят измерения в остальных стандартных растворах. По полученным данным строят градуировочный график в координатах: содержание глюкозы, мг/35 мл – оптическая плотность.
8.2. Ход определения содержания редуцирующих сахаров в пробе
В колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мл раствора гексацианоферрата (III) калия, 8 мл прозрачного фильтрата и 2 мл воды, кипятят точно 1 минуту, сразу охлаждают струей водопроводной воды.
Измеряют оптическую плотность окрашенного в желтый цвет раствора.
По градуировочному графику находят массу редуцирующих сахаров (мг) в анализируемой пробе в пересчете на глюкозу.
Содержание редуцирующих сахаров (Хр.с.) в пересчете на глюкозу (% масс.) рассчитывают по формуле:
где g – найденная по градуировочному графику масса глюкозы в растворе, мг;
V1 – объем приготовленного водного раствора пробы, мл;
V2 – объем водного раствора, взятого для реакции с гексацианоферратом (III) калия мл;
m – масса анализируемой пробы, г.
Лабораторная работа №9 определение общего содержания растворимых углеводов
В группу растворимых углеводов входят моносахариды и низкомолекулярные олигосахариды (степень полимеризации 2…10).
Методика основана на окислении углеводов дихроматом калия в сильнокислой среде:
C6H12O6 + 4 Cr2O72- + 32 H+ → 6 CO2 + 8 Cr3+ + 22 H2O
глюкоза
C12H22O11 + 8 Cr2O72- + 64 H+ → 12 CO2 + 16 Cr3+ + 43 H2O
сахароза
3 C5H10O5 + 11 Cr2O72- + 88 H+ → 15 CO2 + 22 Cr3+ + 62 H2O
ксилит
Образующиеся соединения Cr3+ окрашены в сине-зеленый цвет, их количество пропорционально общему содержанию углеводов в анализируемой пробе.
Реактивы: дихроматом калия, стандартный раствор сахарозы.
Оборудование: весы, водяная баня, мерные колбы, фотоэлектроколориметр.
Порядок выполнения работы.