9. Методика заключения срезов в бальзам.

Методика заключения в бальзам и полистерол одинакова. Разница лишь в том, что при заключении в полистерол можно не прикрывать срезы покровными стеклами.

Вынутое из ксилола стекло со срезом, быстро вытирают с тыльной стороны и положив в горизонтальном положении на стол (или какую – либо плоскую подставку) наносят несколько капель бальзама на край среза. Затем берут приготовленное покровное стекло (чистым пинцетом или двумя пальцами за боковые края), ставят его на предметное стекло у края капли под углом 45⁰, при этом бальзам растекается по краю покровного стекла. Свободный край покровного стекла придерживают препаровальной иглой и медленно опускают покровное стекло на срез. Бальзам при этом вытесняет воздух и растекается тонким слоем под покровным стеклом. Если бальзама было взято недостаточно и между стеклами остался воздух, можно нанести каплю бальзама у того края покровного стекла, где имеется воздух; бальзам затечет под стекло. Если бальзама много и он вытек из-под покровного стекла, его нужно тут же стереть тряпочкой, слегка смоченной в ксилоле.

9. Оценка качества готового гистологического препарата.

К готовому гистологическому препарату предъявляются определенные требования, основными из которых являются:

1. Тонкослойность препарата;

2. Сохранность структур;

3. Контрастность структур;

4. Отсутствие загрязнений и пузырьков воздуха.

Первое требование выполняется в ходе резки на микротоме. Самые тонкие срезы можно получить из блоков, залитых в парафин.

Сохранность структур, в препарате зависит от правильно подобранных методов фиксации, уплотнения, просветления и заключения срезов.

Контрастность определяется используемыми методами крашения.

Последнее требования: отсутствие загрязнений и пузырьков воздуха, в основном зависит от последнего этапа изготовления гистологического препарата - заключения срезов.

Отсутствие любого из этих требований выявляется просматриванием свежеприготовленных препаратов на малом увеличении микроскопа. Однако, исправить на последнем этапе можно будет только те погрешности, которые возникли при заключении:

1. Весь препарат покрыт мельчайшими пылевидными капельками (недостаточное обезвоживание); необходимо сменить растворы, увеличить время обезвоживания;

2. Под стеклом разнокалиберные подвижные пузырьки (при заключении попал воздух; если пузырьки расположены над препаратом и при легком надавливании препаровальной иглой на покровное стекло не исчезают, необходимо перезаключить препарат; для этого стекло с препаратом погружают в ксилол и держат до тех пор, пока покровное стекло сползёт само или легко поддастся смещению препаровальной иглой;

3. Препарат пресекают бесструктурные или зубчатые объемные волоконца, на срезе расположены различные включения (загрязнение препарата в процессе проведения через растворы, загрязнен бальзам или же плохо очищено покровное стекло); фильтруют растворы, тщательно протирают покровные стекла. Хорошие покровные стекла перед употреблением требуют только протирания чистой мягкой тряпочкой. Если покровные стекла, полученные из торгующих организаций, сильно загрязнены, с беловатым налётом, их моют в 1-2% солянокислом спирте, либо в хромпике. Для заключения среза необходимо отбирать наиболее тонкие покровные стекла, которые легко сгибаются, особенно если препарат предполагается изучить с имерсией.

4. В ряде случаев в одном поле зрения не удается одинаково отчетливо видеть все части препарата; лишь вращая микроскопический винт, можно просматривать то одни, то другие участки среза. Это значит, что срез образует волнистые складки и различные его части лежат в разных плоскостях. В таких случаях можно значительно улучшить препарат, поместив на поверхность покровного стекла небольшой груз или зажав препарат бельевым зажимом, пока не затвердеет бальзам (около 24 часов). После этого их можно держать вертикально в специальных коробках с зубчатыми рейками.