3. Виявлення хроматографічних зон

Якщо визначаємі компоненти аналізуємої суміші мають власне забарвлення, то вони виявляються на хроматографічній пластинці у вигляді забарвлених плям або яскравих флуоресціюючих зон в ультрафіолетовому опроміненні. Для виявлення безбарвних сполук потрібні спеціальні прийоми:

• універсальний метод для виявлення плям будь-якої органічної речовини — обприскуван­ня пластинки концентрованою сульфатною кислотою. Органіка обвуглюється й проявляється у вигляді чорних плям. Другий універсальний прийом — занурення висушеної після хроматографування пластинки в камеру з парами йода. Йод конденсується на органічних сполуках більше, ніж на чистому сорбенті й можна спостерігати жовтогарячі плями на жовтому тлі. Цей прийом зручніший тим, що місце розташування плям можна негайно відзначити олівцем, через короткий час йод випаровується із пластинки, а компоненти проби можуть бути піддані подальшому аналізу у випадку його необхідності;

• фізичний метод — обприскування пластинки специфічними флуорес-центними індикаторами. Після хроматографування висвітлюють всю пластинку УФ випромінюванням. Вся пластинка флюоресцирує а ті плями, де локалізовані органічні сполуки залишаються темними і їх відмічають;

• хімічний метод — обприскування пластинки специфічними реагентами, які реагують із одним або декількома обумовленими компонентами. Прикладом такого реагенту є нінгидрин, що дає жовто коричневі плями з амінокислотами Специфічні реагенти допомагають вирішити два завдання. Вони не дають аналітичної реакції з компонентом, що не розділився, і не заважають аналізу. Позитивна реакція зі специфічним компонентом є одночасно його ідентифікацією.

Зазвичай, коли виконують роботу з ідентифікації, знають який компонент (речовину) хочуть виявити в суміші, а також мають зразкову сполуку («стандарт») визначаємої речовини. Ці апріорні відомості дають можливість вибрати експериментальні умови поділу. Якщо в хроматограмі суміші виявиться пляма, що має R_f, що збігається з R_f реактиву, то можна зробити висновок про присутність у суміші даної речовини або про її ідентифікацію. Якщо результати дослідження повторяться за умови застосування інших нерухомої або рухомої фази, то висновок про ідентичність не викликає сумнівів.

Кількісний аналіз виконують тільки по зафіксованій хроматограмі і з попередньою побудовою градуювальної залежності. Метод ТШХ дозволяє швидко винайти зразкову сполуку у суміші, відділення якої іншими хімічними методами майже неможливо. При цьому точність визначення невисока, вона коливається від 3 до 10 % щодо вимірюва­ної величини. Застосовують два методи виміру кількості речовини безпосередньо на пластинці:

• за розмірами плями;

• за інтенсивністю кольору відбитого від плями світла (фотометричний метод).

При кількісних вимірах за межами пластинки пляму визначаємого компонента зіскрібають разом із нерухомою фазою, екстрагують компонент розчин­ником і аналізують розчин, застосовуючи будь-який належний метод: спектрофотометричнй або хроматографічний в газовому або рідинному варіанті.