Порядок і рекомендації щодо виконання роботи

Біосинтез протеаз. Проготувати 100 мл модифікованого середовища Чапека. Встановити рН середовища рівним 8. Розлити по 50 мл середовище у конічні колби місткістю 250 мл. Стерилізувати середовище автоклавуванням. Інокулювати культурою гриба–продуцента ферментів. Інкубувати флакони протягом 7–10 днів при кімнатній температурі. Відфільтрувати культуральну рідину через фільтрувальний папір. Фільтрат використовується як джерело ферментів.

Визначення концентрації протеаз. До 1 мл розчину казеїну в пробірці 1 додати 1 мл фільтрату. Витримати пробірку при кімнатній температурі протягом 1 години. Додати 2 мл розчину трихлороцтової кислоти для зупинки реакції. Відфільтрувати розчин через фільтрувальний папір. Додати 1 мл реактиву Фоліна–Чокальте та 2 мл розчину Na₂CO₃ до 1 мл одержаного фільтрату. Помістити пробірку в киплячу водяну баню на 1 хв у. Додати 6 мл дистильованої води для доведення загального об’єму до 10 мл. Контролем слугує зупинена відразу реакція. Визначити оптичну густину отриманого розчину на фотометрі при довжині хвилі 650 нм (кювета 10 мм).

Побудова калібрувального графіку. Додати 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 та 1 мл стандартного розчину тирозину в пробірки. Довести загальний об’єм дистильованою водою до 1 мл. Додати в кожну пробірку 1 мл реактиву Фоліна–Чокальте та 2 мл розчину Na₂CO_3. Для приготування розчину порівняння додати 1 мл дистильованої води, 1 мл реактиву Фоліна–Чокальте та 2 мл розчину Na₂CO_3. Помістити пробірки в киплячу водяну баню на 1 хв у. Додати в кожну пробірку 6 мл дистильованої води для доведення загального об’єму до 10 мл. Визначити оптичну густину отриманих зразків на фотометрі при довжині хвилі 650 нм (ковета 10 мм).

Визначити концентрацію лужних протеаз в мг/мл за допомогою калібрувального графіку.

Аналіз одержаних результатів

Студенти відповідно до завданя повинні зробити висновки та оформити протокол лабораторної роботи.

Контрольні запитання і завдання

1. На які групи поділяються всі ферменти?

2. Де використовуються протеази?

3. Наведіть найважливіші продуценти лужних протеаз

4. Як приготувати стандартний розчин тирозину?

5. Чим відрізняється склад поживного середовища, яке Ви використовували в лабораторній роботі «Виробництво та визначення лужних протеаз» від того, що використовувалося раніше?

6. Чому для побудови калібрувальної кривої Ви використовували стандартний розчин тирозину?

7. Охарактеризуйте продуцентів протеолітичних ферментів.

8. Охарактеризуйте особливості складу поживного середовища для культивування продуцентів протеаз.

9. Назвіть основні етапи визначення протеолітичної активності культуальної рідини.

10. Охарактеризуйте сфери промислового застосування протеолітичних ферментів.

11. Класифікуйте протеази за оптимумом їх активності по рівню рН.

Література: [].

Лабораторна робота № 4.3

Методи досліджень мікроорганізмів, що беруть участь в перетвореннях сполук заліза

Мета роботи – вивчити залізобактерії з різного природного матеріалу.

Основні завдання роботи

Одержати залізобактерії за методом С.М. Виноградського, дослідити залізоактерії з різних природних джерел