Методика постановки рибт для ликвородиагностики сифилиса

При исследовании крови в общепринятой РИТ, в реакцию вводят 0,05 мл исследуемой сыворотки крови, 0,15 мл комплемента и 0,35 мл антигена. Для приготовления антигена взвесь бледных трепонем разводят в среде выживания так, чтобы в поле зрения было 10-15 микроорганизмов. Однако такая техника постановки реакции при исследовании ликвора не обеспечивает высокой чувствительности теста.

По новой методике при исследовании ликвора в РИТ его объем увеличивают в 4 раза, т.е. в реакцию вводят 0,2 мл. Объемы комплемента (0,15 мл) и антигена (0,35 мл) не меняются, лишь при изготовлении антигена взвесь бледных трепонем разводят в среде выживания до 20-25 микроорганизмов в поле зрения.

После пункции ликвор помещают в сухую, химически чистую и стерильную пробирку. Мутный или с примесью крови ликвор центрифугируют и отсасывают надосадочную жидкость. В реакцию ликвор вводят цельным и неинактивированным. Перед исследованием ликвор можно сохранять в морозильном отделении холодильника при температуре от -12 град. С до -18 град. С в пробирках под резиновыми пробками до 1 месяца. Размораживание производят при комнатной температуре. Повторное замораживание и размораживание не допускается.В остальном методика постановки РИТ с увеличенным объемом ликвора и учет результатов аналогичны общепринятой РИТ. Диагностическая эффективность вышеописанной методики близка к РИФ-ц.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) для выявления антител к антигенам бледной трепонемы широко зарекомендовала себя за рубежом как высокочувствительный и специфический тест.

РПГА заключается в агглютинации эритроци­тов, сенсибилизированных трепонемным антигеном в присутствии специфи­ческих противотрепонемных антител в исследуемой сыворотке. Фактически РПГА относится к специфическим трепонемным тестам, ее применяют в качественном и количественном вариантах, а также в виде макро- и микромодификации (MH-agglutination TP). В тестах гемагглютинации используют таннированные формалинизированные эритроциты барана или птиц (последние предпочти­тельнее, т.к. оседают быстрее), покрытые антигенами, полученными из пато­генных трепонем (штамм Nichols), а также, как показано в последние годы, из культуральных трепонем (5, 8 и 9 штаммы), что фактически не влияет на ход реакции. При наличии в сыворотке антитрепонемных антител наблюдается агглютинация («склеивание») эритроцитов.

Общее мнение исследователей заключается в том, что РПГА является ценным диагностическим тестом при всех формах сифилиса, но особенно чувствительна она при поздних формах заболевания.

Существует микро- и макромодификации постановки РПГА, чаще используется первая из-за экономичности, быстроты постановки и учета результатов. Кроме того, есть качественный и количественный варианты постановки. Последний позволяет определять титры антител в крови. Но при этом, необходимо учесть, что при повторных исследованиях крови в РПГА необходимо использовать одну и ту же тест - систему.

Результаты РПГА учитывают через 1,5-2 ч при микрометоде или на следующий день при макрометоде. Неподвижно стоящие пластины даже при высыхании их содержимого сохраняют полученную картину:

"4+" - положительная РПГА. Эритроциты равномерно выстилают всю поверхность лунки (в виде зонтика).

"3+" - положительная РПГА. Эритроциты выстилают всю поверхность лунки, но часть их соскальзывает к центру.

"2+" - слабоположительная РПГА. Эритроциты образуют пленку на небольшом участке нижней части лунки.

"1+" - отрицательный результат РПГА. На дне лунки эритроциты образуют рыхлый осадок.

"-" - отрицательная РПГА. Эритроциты ровным плотным "колечком" или "пуговкой" лежат на самом дне лунки (без окружающего зернистого осаждения).

Испытание сыворотки крови людей в первых двух разведениях позволяет при качественной постановке реакции быстро выявлять лиц, сыворотки крови которых содержат специфические антитела к антигенам бледной трепонемы. Испытание сыворотки крови количественным методом с помощью двукратных разведений дает дополнительную информацию о концентрации специфических антител в крови.

Реакция весьма проста, легко регистрируется, удобна, не требует при­борного обеспечения. Результат по аналогии с реакцией Вассермана можно оценивать в «плюсах», а также с помощью количественной методики - двук­ратного разведения исследуемой сыворотки, позволяющей оценить концент­рацию (титр) специфических трепонемных антител в крови больного.

РПГАстановится положительной, как правило, спустя 3 недели после появления твердого шанкра. Однако РПГА, как и другие специфические трепонемные тесты, остается положительной длительное время после излечения от си­филиса.

В зависимости от стадии сифилиса чувс­твительность РПГА различна: при вторичном - 100%, при скрытом - 97%, при позднем - 94%, тогда как при первичном сифилисе соответствует 70%. Специфичность выше, чем у РИФабс, - около 99%.

Сравнительное изучение РПГА, РИТ, РИФ-абс, КСР и МР показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при сифилисе, совпадающую с результатами РИФ-абс.

При дифференциальной диагностике следует учитывать, что ложноположительные результаты РПГА могут наблюдаться при мононуклеозе, наркомании, коллагенозах, лепре и дру­гих заболеваниях.