Методи фіксації та фарбування препаратів.

Фіксують мазки крові метиловим спиртом - 3 хв або фіксатором-барвником Май-Грюнвальда - 3 хв. Після точної фіксації препарати промивають проточною або дистильованою водою.

Для пофарбування мазків використовують фарбу Романовського, яка продається у готовому вигляді. Готову фарбу Романовського розводять дистильованою водою (рН 7) або буферним розчином (до 100 мл води додають 0,5 мл розчину однозаміщеного фосфату калію (13,614 г в 1 л води) і 0,5 мл розчину двозаміщеного фосфату натрію (17,838 г в 1 л води); рН розчину - 6,8-7,2. Отриману розведену фарбу необхідно від-титрувати на мазках біоматеріалу для встановлення оптимального часу пофарбування препаратів. Орієнтовно через 10-12 хв мазки змивають водою і висушують.

Нефіксовані мазки товстої краплі фарбують, використовуючи фарбу Романовського того ж розведення, що і для пофарбування мазків крові. Експозиція пофарбування 8-10 хв. Відбувається вилуговування еритроцитів. Потім фарбу зливають і на препарати наливають нову порцію фарби Романовського на 30-35 хв. Предметні скла обережно промивають водою і висушують.

Фарбування за Папенгеймом. Мазки фіксують 3 хвилини у фіксаторі-барвнику Май-Грюнвальда (0,5 г еозиновокислого метиленового синього змішують з 200 мл метилового спирту). Препарати промивають водою і наливають на них розведену за титром фарбу Романовського. Через 10-12 хв препарати промивають водою і сушать.

Пофарбування препаратів крові для виявлення базофільної зернистості еритроцитів. Фіксований препарат крові (3-5 хв в метиловому спирті) покривають високим шаром фарби Романовського на 1 год після чого промивають водою і висушують.

Визначення концентрації гемоглобіну. Кольоровий показник.

Концентрацію гемоглобіну (Нb) визначають для діагностики багатьох патологічних станів (анемій, еритремій, вторинних еритроцитозів), оцінки ступеня крововтрат, згущення крові при дегідратації організму, функцій кісткового мозку. Вміст гемоглобіну визначають геміглобінціанідним методом та за допомогою візуального гемоглобінометру Салі. Гемоглобін при взаємодії з червоною кров'яною сіллю окислюється в метгемоглобін, який утворює з ацетонціангідрином зафарбований ціанметгемоглобін (геміглобінціанід), інтенсивність кольору якого прямо пропорційна концентрації гемоглобіну. За допомогою гемометра Салі, при змішуванні крові з соляною кислотою, гемоглобін перетворюється в солянокислий гематин. При цьому колір рідини змінюється з червоного у коричневий. Розчин розводять до кольору стандарту, який відповідає певній концентрації гемоглобіну (в г%). Для перерахунку в г/л кількість гемоглобіну в г% множать на 10 (коефіцієнт перерахунку). При роботі з старим гемометром Салі визначають коефіцієнт поправки.

Нормальна концентрація гемоглобіну в крові

Коти 8-15 г/л

Собаки 120-180 г/л

Цуценята 74-180 г/л

підвищення

Первинні і вторинні еритроцитоз;

Відносний еритроцитоз при дегідратації.

зниження

Анемії (залізодефіцитна, гемолітична, гіпопластична, В12-фолієводефіцитна);

Гостра крововтрата (в першу добу крововтрати через згущення крові, обумовленого великою втратою рідини, концентрація гемоглобіну не відповідає картині істинної анемії);

Приховані кровотечі;

Ендогенна інтоксикація (злоякісні пухлини та їх метастази);

Ураження кісткового мозку, нирок і деяких інших органів;

Гемодилюція (внутрішньовенне введення рідин, помилкова анемія)

Для діагностики анемічних станів показники гемоглобіну необхідно оцінювати в комплексі з іншими характеристиками червоної крові.