Диагностика хелико-бактериальной инфекции

В практической педиатрии наиболее распространен уреазный метод, основанный на определении фермента уреазы биохимическим способом.

Шаг первый: биологический биоптат помещается в диагностическую среду, содержащую индикатор и мочевину.

Шаг второй: в условиях гидролиза мочевины изменяется рН среды, в результате чего индикатор окрашивается от желтого до малинового цвета.

Шаг третий: степень инфицирования Нр-уреазаным методом оценивается следующим образом (-) – результат отрицательный – малиновое окрашивание наступает позже, чем через сутки; (+) – незначительная инфицированность (малиновое окрашивание наступает к концу суток); (++) – умеренная инфицированность (малиновое окрашивание наступает в течение двух часов); (+++) – значительная инфицированность (малиновое окрашивание наступает в течение первого часа).

Из других методов широко используется иммуноферментный анализ (ИФА), позволяющий определить в крови больного специфические антитела к Ир.

Перспективен дыхательный тест (определение уреазной активности в выдыхаемом воздухе) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) – метод, позволяющий найти в исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической информации (определение ДНК возбудителя).

Шаг первый: для ПЦР – анализа пригоден любой материал (например, исследуется кал); специфичность ПЦР при определении Н.pylori составляет 100%.

Шаг второй: достоинство ПЦР состоит и в том, что она позволяет не только диагностировать инфекцию, но и в более ранние сроки эффективно оценить эрадикацию – уже через две недели после завершения эрадикационной терапии. Для диагностики Н.pylori используется еще и, так называемый, морфологический метод.

Шаг третий: материалом для исследования служит участок слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки, изъятый при проведении фиброгастродуоденоскопии. Обязательным для исследования биоптаты антрального отдела в 2-3 см от привратника из участка визуально более выраженного воспаления (гиперемия, отек), но не со дня эрозии или язвы. Частота выявления составляет не менее 75-80%.

Шаг второй: из полученного биоптата выделяют и культивируют бактерии рН на основе эмульсии яичного белка. Нр растет в микроаэрофильной атмосфере состоящей из 5% О₂, 5-10% СО₂, остальные – N₂; она не может расти в анаэробных условиях. Такую атмосферу в микроаэростате создают с помощью газогенераторных пакетов, которые начинают продуцировать газовые смеси при добавлении в них воды около 98%, рН 6,9-8,0. Используют пакеты «Кампилага». Оптимальная температура для роста бактерий 37⁰С, время инкубации 3-7 дней.

Шаг третий: рассев материала производится следующим образом – транспортную среду выливают глазным пинцетом и затем делают серию мажущих движений биоптатом по агару, стараясь захватить как можно большее пространство агара (основная масса бактерий находится в слое слизи на поверхности эпителия, а не в самой ткани). На кровяной питательной среде Нр за 3-5 суток формирует мелкие круглые гладкие прозрачные росинчатые колонии, диаметром 1-3 мм.

Шаг четвертый: в дальнейшем производится идентификация выделенной культуры. Производят окрашивание по Грамму для микроскопии. Нр выглядит в виде грамотрицательных изогнутых S – образных или V-образных палочек. На одном конце находятся жгутики.

Шаг пятый: далее проводят изучение биохимических свойств бактерий – определяя их уреазцию, каталазную, оксидазную активность, образование сероводорода. Продукция в большом количестве уреазы является наиболее характерным признаком Нр.

Морфологический метод – «золотой стандарт» диагностики Нр: окраска бактерии в гистологических препаратах слизистой оболочки желудка по Гимзе, толуидиновым синим, Вартину – Стари, Гепте позволяет обнаружить Нр в биоптатах и одновременно изучить морфологию слизистой.

Цитологические исследования:

Шаг первый: используют мазки – отпечатки, полученные при эндоскопии из биоптата слизистой оболочки антрального отдела, который берется прицельно из участка с наиболее выраженными визуальными отклонениями от нормы (гиперемия, отек), но не со дня язв и эрозий.

Шаг второй: высушенные мазки окрашиваются по Панкенгейму или после фиксации метанолом – азурэозиновой смесью, или готовым красителем Романовского-Гимзы.

Можно выделить 3 степени обсеменения:

- слабую (+) – до 20 микробных тел в поле зрения;

- среднюю (++) – от 20 до 50 микробных тел в поле зрения;

- выраженную (+++) – более 50 микробных тел в поле зрения.

Наиболее простым и доступным из гистологических методов является окраска по Гимзе без дифференцировки. Нр при этом окрашивается в темно-синий цвет. Они хорошо видимқ как на поверхности, так и в глубине ямок. Для оценки состояния слизистой и обнаружения Нр достаточно 2-х биоптатов.