5.6.3. Хроматография на бумаге

Хроматография на бумаге не требует дорогостоящего обору­дования, чрезвычайно проста в исполнении. В этом методе соче­тается разделение с одновременным обнаружением или иденти­фикацией веществ. Бумага удерживает в порах воду—неподвиж­ный растворитель. Нанесенные на хроматографирующую бумагу вещества переходят в подвижную фазу и, перемещаясь с различ­ными скоростями по капиллярам бумаги, разделяются. Способ­ность веществ к разделению оценивается коэффициентом R_f, пред­ставляющим собой отношение величины смещения зоны вещества h к смещению фронта растворителя Н:

R_f = h/H.

Численные значения R_f зависят от природы подвижной и стацио­нарной фаз, коэффициента распределения и сорта хроматографирующей бумаги. Существенное значение для эффективного разде­ления имеют условия эксперимента.

Техника выполнения хроматографии на бумаге может быть различной (табл. 5.5). Каплю исследуемого раствора наносят на фильтровальную бумагу, подсушивают, далее бумагу подвешива­ют вертикально в сосуде с растворителем. Растворитель может либо стекать сверху (нисходящая хроматограмма), либо подни­маться вверх по бумаге, нижний конец которой опущен в раство­ритель.

Радиальная хроматограмма получается при нанесении капли испытуемого раствора в центр круглого листа хроматографирующей бумаги. Растворитель в этом случае подается по фитилю в центр пятна. Двухмерная хроматограмма (табл. 5.5) позво­ляет проводить идентификацию даже сложных смесей с близкими значениями R_f.

Если хроматографическую бумагу предварительно пропитать реагентом, образующим труднорастворимые осадки с разделяе­мыми ионами, то на хроматограмме получатся концентрические зоны малорастворимых осадков, располагающиеся от центра к пе­риферии в порядке увеличения их растворимости. Обнаружение веществ на хроматограмме проводят по окраске образующихся зон либо после проявления зоны специальными реагентами. Мож­но использовать флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. В табл.5.6 в качестве примера приведены условия получения хроматограмм и обнаружения ионов на бумаге, пропитанной осадителем.

Хроматографию особенно широко применяют в биохимических анализах, например для разделения аминокислот и пептидов, алкалоидов, стероидов, различных экстрактов из природных про­дуктов. Преимуществом ее является то, что для анализа достаточ­но очень небольшого количества вещества (порядка нескольких микрограммов).

Использование хроматографии на бумаге в количественном анализе ограничено, так как получаются плохо воспроизводимые и недостаточно точные результаты.

Таблица 5.5.

Способы получения хроматограмм на бумаге

Вид хроматограммы	Положение бумаги	Направление движения растворителя
Восходящая Нисходящая Радиальная Двухмерная	Вертикальное в сосуде То же Горизонтальное Вертикальное в сосуде	Снизу вверх Сверху вниз От центра к периферии Сначала в одном направлении; после высушивания повторное хроматографирование в направ­лении, перпендикулярном перво­начальному

Таблица 5.6.