Ферменты и соляная кислота желудочного сока Опыт 1. Определение кислотности желудочного сока.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Ознакомить с формами выражения кислотности желудочного сока и овладеть методикой определения кислотности.

ДЛЯ РАБОТЫ НЕОБХОДИМО: Желудочный сок, 0,5%-ный спиртовой раствор диметиламидоазобензола, 1% фенолфталеина, 0,1 н раствор едкого натра, химические стаканчики, бюретки для титрования, пипетки на 5 мл и глазные пипетки.

ХОД РАБОТЫ. В колбу отмеряют 5 мл желудочного сока добавить 2-3 капли диметиламидоазобензола и 1-2 капли фенолфталеина. Жидкость приобретает красный цвет. Затем проводят титрование 0,1 н раствором едкого натра. Цвет жидкости изменяется, сначала он становится желто-розовый, далее желтый и наконец, приобретает стойкий розовый оттенок.

Количество 0,1 н р-р NaOH, пошедшего на титрование до желто-розового цвета соответствует свободной HCl.

Количество 0,1 н р-р NaOH, пошедшего на титрование от желто-розового цвета до стойкого розового цвета соответствует связанной HCl и кислореагирующими продуктами.

Количество 0,1 н р-р NaOH, пошедшего от начала титрование до стойкого розового цвета будет соответствовать общей кислотности желудочного сока.

Известно, что 1 мл 0,1 н р-ра щелочи нейтрализует 1 мл 0,1 н р-ра соляной кислоты. Он содержит 0,00365 г соляной кислоты.

Следовательно, процент свободной соляной кислоты узнают умножением числа мл 0,1 н в 100 мл NaOH, пошедший на нейтрализацию соляной кислоты в 100 мл желудочного сока на показатель 0,00365.

Примерный расчет

Кол-во	Индикатор	До цвета	Нейтрализация кислот	Расход 0,1 н р-р NaOH мл		Свободн. HCl в жел.соке в %
				На5 мл жел.сока	На 100 мл жел.сока
5 мл	Диаметиламидоазобензол	Желто-розового	Свободная HCl	5,2	104,0	0,3796
	Фенолфталеин	Стойко-розового	Связанная HCl и кислореагирующие продукты	0,3	6,0
			Общая кислотность	5,5	110,0

Опыт 2. Определение протеолитической активности желудочного сока.

ЦЕЛЬ ОПЫТА. Освоить методику определения протеолитической активности желудочного сока и выяснить условия оптимального действия ферментов.

ПРИБОРЫ И МАТЕРИАЛЫ: штативы с пробирками, пипетки, водяная баня с термометром, спиртовка, вата.

РЕАКТИВЫ: желудочный сок, 0,25%-й раствор НCl, 2%-й раствор соды, куриный белок, 10%-й раствор NaOH, 1%-й раствор сернокислой меди.

Для работы желудочный сок берут либо натуральный, либо готовят искусственный. Для этого 2 г пепсина растворяют в 100 мл 0,25%-го раствора НCl.

ХОД РАБОТЫ: берут 4 пробирки и подготавливают их следующим образом.

В пробирку №1 наливают 2 мл желудочного сока и добавляют 0,5 мл куриного белка.

В пробирку №2 наливают 2 мл желудочного сока, кипятят его, охлаждают и добавляют 0,5 мл куриного белка.

В пробирку №3 наливают 2 мл желудочного сока, нейтрализуют его содой (2 мл 2%-го раствора соды) и добавляют 0,5 мл куриного белка.

В пробирку №4 наливают 2 мл 0,25%-го раствора НCl и добавляют 0,5 мл куриного белка.

Все пробирки помещают в водяную баню 38-40⁰С на 30-40 минут. По истечении этого времени пробирки вынимают, охлаждают под струей воды и проводят реакцию с содержимым на наличие в них продуктов гидролиза белка, поставив биуретовую реакцию.

Для этого в каждую опытную пробирку добавляют по 1 мл 10%-го раствора NaOH и 4-5 капель 1%-го раствора сернокислой меди, взбалтывают. При наличии белка появляется сине-фиолетовое окрашивание, при наличии смеси пептидов – розово-фиолетовое или розовое (разных оттенков), в зависимости от степени гидролиза белка.

В пробирке №1 жидкость окрасится в фиолетово-розовый или розовый цвет. В пробирках №2, №3 и №4 жидкость приобретает фиолетово-синюю окраску, что свидетельствует о нерасщеплении белка.

Сделать выводы о наличии протеолитических ферментов в желудочном соке и условиях ферментативного расщепления

Тема