Штам мікроорганізму

Для характеристики об'єкта винаходу "штам мікроорганізму, культура клітин рослин і тварин" використовують такі ознаки:

Для характеристики індивідуальних штамів мікроорганізмів, зокрема, використовують:

• культурально-морфологічні характеристики із зазначенням температури вирощування та віку культури (характеристику вегетативних клітин, колоній, повітряного і субстрактного міцелію для мікроміцетів та актиноміцетів, стадії росту в рідкому середовищі для бактерій; дріжджів, мікроводоростей);

• фізіолого-біохімічні характеристики (характерні метаболіти, відношення до температури, кисню, pH, використання джерел азоту та вуглецю);

• хемо- та генотаксономічну характеристику;

• каріологічну характеристику (для еукаріот);

• маркерні характеристики: генетичну, антигенну, біохімічну, фізіологічну;

• біотехнологічну характеристику: назву корисної речовини, яку виробляє штам, або інше призначення штаму із зазначенням стабільності корисної властивості при тривалому культивуванні, рівень активності (продуктивності);

• вірулентність, антигенну структуру, імуногенність, серологічні особливості, онкогенність, чутливість до антибіотиків, антагоністичні властивості (для штамів мікроорганізмів медичного та ветеринарного призначення);

• характеристику батьківських штамів (партнерів), принцип гібридизації (для штамів гібридних мікроорганізмів).

Використовують також інші характеристики, що дають змогу ідентифікувати індивідуальні штами мікроорганізмів.

Для характеристики індивідуальних штамів культур клітин рослин або тварин, зокрема, використовують:

• родовід культур;

• число пасажів на час паспортизації;

• стандартні умови вирощування;

• культуральні властивості;

• ростові (кінетичні) характеристики;

• характеристику культивування в організмі тварини (для гібрида);

• цитогенетичні (каріологічні) характеристики;

• цитоморфологічні характеристики;

• здатність до морфогенезу (для клітин рослин);

• дані щодо приналежності до певного виду (для клітин тварин);

• онкогенність (для культур клітин тварин, включаючи гібридоми);

• маркерні характеристики: цитогенетичні, імунологічні, біохімічні, фізіологічні;

• контамінаційні характеристики (найпростіші гриби, дріжджі, бактерії, мікоплазми, віруси);

• біотехнологічні характеристики: назву і (або) характеристику корисної речовини, яку продукує культура, чи інше призначення культури із зазначенням стабільності корисної властивості при тривалому культивуванні, вихід продукту в середовище, рівень активності (продуктивності);

• кріоконсерваційні характеристики та інші характеристики, що дають змогу ідентифікувати індивідуальні штами культури клітин рослин або тварин.

Для характеристики консорціумів мікроорганізмів, культур клітин рослин і тварин додатково до зазначених для індивідуальних штамів ознак, зокрема, використовують: походження (джерело виділення), фактор і умови адаптації та селекції, таксономічний склад, подільність, число і домінуючі компоненти, культурально-морфологічні і фізіолого-біохімічні ознаки індивідуальних компонентів, типи і фізіологічні особливості консорціуму в цілому, співвідношення і замінність штамів, характеристики нових індивідуальних штамів та інші характеристики, що дають змогу їх ідентифікувати.

Приклад для винаходу «Евритермальний штам мікроорганізму bacillus species № 205 – деструктор вуглеводнів, поверхнево-активних речовин і ксенобютиків та їх сполук» 5- й розділ.

Одержаний евритермальний штам бактерій Bacillus species №205 задепонований в Інституті мікробіологи і вірусологи НАН України їм Д К Заболотного Культурально-морфолопчні ознаки клітини уявляють собою гр (+), рухомі перітрихіальні жгутування, спороутворюючі палички розміром 1,2x1,4x0,6 - 0,9мкм Створюють термостійкі ендоспори розміром 0,5-0,7мкм На лептонному агарі (МПА) при температурі +28 ⁰С, 48 годинах культивування створюють НІЖНІ прозорі колони, потім стають безколірними, потім кремові, ІНОДІ пігмент проникає в субстрат Створення пігменту відбувається від краю до центру колонії Колонія гладка, блискуча, краї хвилясті На м'ясо-пептонному бульйоні (+28⁰С, 48 годин) створює плівку і муть. На агаризованому середовищі Кінга створює пігмент шоколадно-коричневого кольору На синтетичному мінеральному середовищі, на морській воді (+28⁰С, 48 годин) створює МІЛКІ сіруваті колони діаметром 1,5 - 2,3мм Колонії на твердих агаризованих середовищ не ослизнюються протягом тривалого збереження.

Фізюлого-бюхімічні ознаки

Факультативний аероб Здатний рости при температурі від 10⁰С до 42,5⁰С Оптимум зростання 20-27⁰С Зріст на середовищі з NaCL - 5%, 7%, 10% і вище.

Морська сіль - 1,8%, амоній хлористий - 1,0г, калій фосфорнокислий двозахищений - 1,0г, дестибютин - 0,001% розчину (або дріжджовий екстракт - 1 мл, вода водопровідна - 1000мл, рН середовища 7,2-7,5 з добавкою нафти і нафтопродуктів зріст у вигляді рівномірного змутніння)

Відношення до вуглеводородів

Росте на середовищах, які містять нафту, парафін, О-ксілол, дизельне паливо, мастильне мастило Розкладає ксенобютики, які відносяться до азофарбників і діазофарбників.

СТІЙКІСТЬ ДО солей важких металів

Cd-ЮО у/мл,

Ug - 25 у/мл,

Сг+3-1ООу/мл,

Сг+6 - 25у/мл

РЬ від 25у/мл до 1000у/мл,

Zn-ЮООу/мл,

Оксилази створює (+),

Каталази створює (+),

Лециталази створює (+),

Желатин розжижує,

Аміак не створює,

Сірчистий водород не створює,

Відношення до Твін 80 - позитивне,

Нітроредуктази не створює

Здібність до утилізації різних вуглеводів

Субстрат Здібність до утилізації цукрів

Глюкоза +х,

Лактоза+,

Макнит+,

х+ Здібність до утилізації вуглеводів

Відношення до антибіотиків

Чутливий до таких антибіотиків стрептоміцину, гентаміцину, катаміцину, левоміцетину, тетрацикліну, ампіцикліну, анандоміцину, поліміксину Запропонований штам утилізує в якості джерела живлення нафту, нафтопродукти (дизельне паливо), ксенобютики (оранжевий діазофарбник Sundizamme Orange GR).

Повне зруйнування вуглеводородів відбувається в морському середовищі при використанні додаткових біогенних стимуляторів, наприклад, дестибютину, дріжджового екстракту.

В аналогічних умовах штам Bacillus species №205 здійснює 98-100% деструкцію нафти у концентрації 45 Омг/л за 24 години, 98-100% - дизельного палива в концентрації 450мг/л, 20 діб, 98 100% - ксенобютиків в концентрації 300мг/л за 24 доби і 93-100% - ксенобютики + нафтопродукти (в комплексі) в концентрації 600 с/л - 36 діб.

ПАР - сульфенол в концентрації 001% з додаванням ксенобютика та бензола - 2,5 с/л за доб.у

Штам вивільнює від вуглеводородів (нафти, дизельного палива) і ксенобютиків (оранжевий, діазофарбник - Sunchramim Orang GR) морську воду без введення додаткових видів мікроорганізмів.