Определение числа евтрофных и олиготрофных микроорганизмов методом глубинного посева и посева на поверхность плотной питательной среды

Из отобранных проб, после тщательного перемешивания готовят ряд десятикратных разведений.

Для посева в глубину питательной среды 1 мл пробы воды или соответствующего ее разведения вносят в стерильные чашки Петри, слегка приоткрыв крышки.

Сразу же после внесения пробы воды в каждую чашку вливают 5-7 мл расплавленной и остуженной до 45С питательной среды. Смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя его по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха и попадания агара на края и крышку чашки.

Для посева на поверхность питательной среды 0,1 мл соответствующего разведения наносят на поверхность среды и растирают шпателем.

Для учета морских евтрофных бактерий используют модифицированную среду Зобелла следующего состава (г): пептон - 5,0; КН₂РО₄·3Н₂О - 0,084; FeSO₄·7H₂O - 0,185; NaCl - 24,0; MgSO₄·7H₂O - 1,0; KCl - 0,7; дрожжевой экстракт - 1,0; агар - 20 г; вода дистиллированная - 1 л. Для учета пресноводных евтрофных микроорганизмов используют РПА.

Для учета морских олиготрофных бактерий использовали среду следующего состава (Тyler, Marshall, 1967): дрожжевой экстракт - 0,05 г; агар - 10 г; морская вода - 1 литр. Для учета олиготрофных пресноводных бактерий используют голодный агар на обеспложенной природной воде.

Время инкубации проб воды зависит от состава среды и исходной численности микроорганизмов в пробе воды. Как правило, для евтрофных бактерий время инкубации составляет не более 7 суток, а для олиготрофных около месяца.

Для подсчета выбирали чашки с изолированными колониями. Посевы ежедневно просматривали. Учитывали все колонии, появившиеся на поверхности и внутри среды. После подсчета выросших колоний результаты посева представляют как количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в единице объема пробы воды. Подсчитанное число колоний на каждой чашке умножали на степень разведения воды, получая, таким образом, число, соответствующее количеству микробов в 1 мл исследованной пробы.

Сравнение эффективности метода предельных разведений и метода посева на поверхность плотной питательной среды для учета морских бактерий, показало, что при одном и том же содержании органического углерода в обеих средах, на жидкой среде удавалось учесть на один - два порядка больше бактерий, чем на агаризованной. Это связано с тем, что многие водные бактерии не способны к росту на твердых поверхностях, таких, как агаровая пластинка, но дают рост в жидкой питательной среде.

Характер бактериоценозов в воде определяется не только внешними условиями, но и направленностью бактериальных процессов, обусловленных физиолого-биохимическими особенностями микробов и характером органического субстрата. Органическое вещество, попадая в воду, окисляется евтрофными микробами без периода адаптации. Учитывая вышеизложенное в экологическом мониторинге водных экосистем необходимо определять не только ОЧБ по прямому счету, но и количество бактерий отдельных групп гетеротрофных микроорганизмов. Олиготрофные микроорганизмы являются естественными обитателями морских водных экосистем, характеризующихся в норме сравнительно небольшими концентрациями органических веществ, в отличие от евтрофных, являющихся приносными микроорганизмами, обитающими в средах с гораздо большим содержанием органики, и, соответственно, подвергавшихся загрязнению. Выявление источника загрязнения органическим веществом по количеству евтрофных бактерий статистически достоверно.