- •Лабораторная работа №2 методы исследования в биохимии Фотометрия
- •1. Принцип и техника колориметрирования. Устройство и правила работы на кфк-2
- •1.Устройство фотоэлектроколориметра кфк-2
- •Выбор светофильтра
- •3. Подбор кювет
- •4. Общая схема прибора и обозначения
- •5. Правила работы на спектрофотометрах или фотометрах
- •2. Определение общего белка по биуретовой реакции
- •Экспериментальная часть
- •3. Рефрактометрический метод определения белка в молоке
- •Экспериментальная часть
3. Рефрактометрический метод определения белка в молоке
Принцип метода. Он основан на установлении разности показателей преломления исследуемого молока и раствора, полученного после осаждения белков раствором хлористого кальция при кипячении.
Содержание белка в молоке и молочных продуктах является факторам, обусловливающим пищевое достоинство. От количества белка в молоке зависит в значительной мере выход молочных продуктов, например творога, сыров. Поэтому содержащие белка в молоке, полуфабрикатах его переработки и готовых молочных продуктах является важным показателем их качества.
Рефрактометр ИРФ-22 (рис.2) состоит из следующих основных частей: корпуса, на котором смонтирована измерительная головка, состоящая из двух полушарий, служащих правами измерительной и осветительной цризм; зрительной т^убы с о, счетным устройством и термометра. Показатель преломления изучаемых веществ зависит от температуры, которая поддерживается при пропускании воды через камеры в оправах линз. Цля этого измерительная головка присоединяется к ультратермостату так, чтобы вода поступала в верхнюю часть этой головки и выходила из штуцера, в котором зафиксирован термометр. Температура воды на выходе должна составлять 20±1°С. Измерительная головка плотно соединена со шкалой отсчетного устройства, которое помещается внутри корпуса прибора. Для установления границы раздела и совмещения ее с перекрестием сетки можно наклонять измерительную головку до 60", вращая махови-
чок, который находится с противоположной стороны.
Техника определения — перед началом работы проверяют правильность установки прибора на нуль по дистиллированной воде. Затем откидывают верхнюю часть измерительной головки, промывают спиртом или дистиллированной водой поверхность измерительной и осветительной пршм, удаляя следы жидкости фильтровальной бумагой. Оплавленным концом стеклянной палочки на поверхность измерительной призмы наносят 3—4 капли жидкости и осторожно опускают верхнюю часть измерительной головки на нижнюю, наблюдая в окно головки, чтобы жидкость заполнила зазор между призмами. Глядя в окуляр зрительной трубы, осветительное зеркало устанавливают так, чтобы свет от источника через окно поступал в осветительную призму и равномерно освещал поле зрения. Вращая маховичок, добиваются появления в поле зрения границы светотени, которую подводят к центру перекрестия сетки. Резкость границы светотени и
Рис.
2. Рефрактометр ИРФ-22:
1—
зрительная труба с отсчетным устрой-ством;
2
—
корпус; 3
—
барабан со шкалой; 4
—
маховичок для вращения призмы; 5 —
шланг;
6
—
измерительная головка; 7 — корпус
термометра; 8 —штуцера; 9
— осветительное
зеркало
штрихов шкалы для глаза наблюдателя устанавливают вращением гайки окуляра. Если граница светотени при измерении показателя преломления окажется расплывчатой, радужной, то вращением рукоятки компенсатора добиваются четкости этой границы и записывают показание шкалы. Целые, десятые, сотые и тысячные доли отсчитывают по шкале, а десятитысячные доли оценивают на глаз. Таким образом проводят не менее трех определений, принимая за окончательный результат среднее арифметическое значение.
