- •Содержание
- •Культивирование клеток
- •Культивирование клеток микроорганизмов
- •Классификация процессов культивирования
- •Получение накопительных и чистых культур
- •Методы культивирования на твердых средах
- •Процессы суспензионного или глубинного культивирования
- •Периодическое культивирование
- •Продленное периодическое культивирование
- •Глубинное периодическое культивирование
- •Многоциклическое культивирование
- •Полунепрерывное культивирование
- •Непрерывное культивирование
- •1 ™ Такому принципу ведут стадию бро- х° жения при производстве пива в ба
- •Синхронно делящиеся культуры микроорганизмов
- •Регенерация клеточной стенки и реверсия к клеточным формам
- •Культивирование растительных клеток
- •Методы создания клеточных культур растений
- •Протопласты растительных клеток
- •1.3. Культивирование животных клеток
- •Культуральные системы животных клеток
- •Типы культуральных систем
- •Монослойные культуры
- •Суспензионные культуры
- •Субстраты для культивирования биообъектов Принципы составления питательных сред
- •Оборудование для очистки воды
- •Приборы и аппараты для мытья и стерилизации посуды
- •Приборы для дозирования, разведения и пробоотбора
- •Устройства для приготовления питательных сред
- •Помещения для работы с культурами клеток
- •Культуральная посуда
- •Методы общей бактериологии. М.: Мир, 1983. Т. 1, ч. 2. С. 163-512.
- •Культивирование клеток
- •220050, Минск, проспект Франциска Скорины, 4.
- •220030, Минск, ул. Красноармейская, 6.
Оборудование для очистки воды
Качество воды, используемой для приготовления питательных сред либо для мытья культуральной посуды, имеет важное значение. До недавнего времени такая вода приготавливалась путем простой и двукратной дистилляции питьевой воды. В настоящее время наряду с традиционными широкое применение получили методы очистки воды путем использования физико-химических процессов обратного осмоса, ионного обмена и мембранной фильтрации. Водопроводная вода, используемая в качестве исходной и прошедшая в этих установках через очистку обратным осмосом, поступает на фильтры из активированного угля, с них - на колонки с ионообменными смолами и затем - на мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм. При необходимости вода дополнительно подвергается воздействию мощного потока УФ облучения.
Для очистки воды подобным способом наиболее часто применяются установки типа ОВ-1, состоящие из двух конструктивно самостоятельных частей, допускающих независимое использование, - ОВ-2 и ОВ-3. Установка ОВ-2 осуществляет приготовление общелабораторной воды, превосходящей по качеству очистки дистиллированную воду. Установка ОВ-3 предназначена для получения пригодной для приготовления питательных сред сверхчистой из общелабораторной или дистиллированной воды.
Приборы и аппараты для мытья и стерилизации посуды
Приборы и аппараты для мытья и стерилизации посуды обеспечивают выполнение всех этапов технологического процесса: предварительную стерилизацию посуды, поступающей из опыта, насыщенным водяным паром в паровых стерилизаторах (автоклавах); предварительное замачивание в водных растворах химических реагентов (5 % растворе гипохлорита натрия, 3 % растворе перекиси водорода и т. д.); полоскание после замачивания холодной или слегка нагретой водой; мытье горячим раствором детергента с низким пенообразованием; вторичное полоскание горячей водой; финишное полоскание дистиллированной или общелабораторной водой; сушку в сушильных шкафах с принудительной продувкой горячим воздухом; упаковку и финишную стерилизацию в паровых или воздушных стерилизаторах.
Оптимальным вариантом для мытья посуды является использование автоматических моечных машин («Forma Scientific», «Miele», «Hotpack- Heinicke» либо отечественных машин типа P3-AMM).
Приборы для дозирования, разведения и пробоотбора
В практике работ с клеточными культурами постоянно возникает необходимость массового дозирования, пробоотбора или разведения биологически активных жидкостей. Для этого используются автоматические или полуавтоматические устройства, называемые в различных источниках дозаторы-дилюторы, автоматические пипетки и т. п.
Одним из основных требований к такого рода приборам является отсутствие контакта между дозируемым раствором и частями конструкции дозатора. Данным требованиям отвечают полуавтоматические и автоматические шприцевые дозаторы, которые производят разведение или дозирование одновременно по двум каналам и могут работать как в автоматическом, так и полуавтоматическом режимах.
Наиболее часто применяемый автоматический шприцевой дозатор типа «Дозатрон-4» предназначен для автоматического дозирования жидкостей в иммунологические планшеты с микрокюветами. Объем единичной дозы устанавливается в зависимости от целей эксперимента.
Пипетки лабораторные типа ПЛ-01, дозаторы пипеточные типа КДП-1 и П1 производят полуавтоматическое дозирование биологически активных жидкостей. Пипетки лабораторные ПЛ-01 поставляются в наборах из 3 моделей. Величина дозы задается пользователем в определенном диапазоне (2-20 мкл, 20-200 мкл, 200-1000 мкл). Комплект дозаторов пипеточных КДП-1 включает 8 моделей, каждая из которых обеспечивает выдачу 2 фиксированных по объему доз (от 5 до 1000 мкл). Комплект дозаторов П1 включает 5 моделей, настроенных на 1 фиксированную дозу (от 20 до 500 мкл). Все указанные типы устройств предполагают использование сменных наконечников, которые могут подвергаться паровой стерилизации и повторно использоваться.
Описанные выше приборы позволяют работу с жидкостями, нагретыми до 40° С и имеющими вязкость, близкую к вязкости воды. Тем самым не обеспечивается дозирование питательных сред на основе агара, которые для придания им малой вязкости должны быть нагреты до температуры не менее 60о С. В таких случаях используются приборы типа «Агар-1». Этот аппарат для разлива питательных сред, состоящий из перистальтического насоса-дозатора и разливочного механизма, обеспечивает автоматическое одновременное заполнение в течение 1 мин 16 стеклянных чашек Петри диаметром 100 мм, находящихся в специальных планшетах. Стерильные условия в аппарате поддерживаются путем УФ облучения его внутреннего объема.
В экспериментах также применяются устройства малой лабораторной техники, не являющиеся по своей сути дозаторами, но способные облегчить этот процесс. Это так называемые приборы «Pipet-Aid» (фирмы «Flow», «Bellco», «Cole-Parmer» и другие), предназначенные для пробо- отбора и выдачи дозы при работе с пипетками Пастера и любыми градуированными пипетками емкостью до 75 мл. Пипетка вставляется в специальный держатель, соединенный с малогабаритным вакуумным насосом, находящимся либо непосредственно в держателе, либо автономно. Управление работой прибора производится нажатием кнопок, размещенных на держателе.
