4. Иммерсионный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения.

Иммерсионный объектив (от лат. immersio — погружение) - между фронтальной линзой объектива и объектом находится иммерсионная среда:

• вода (n=1,33) - водная иммерсия;

• глицерин (n=1,43) - глицериновая иммерсия;

• иммерсионное масло (n=1,51) - масляная иммерсия.

Для исключения преломления света => уменьшается величина преломляющей способности

Сфера применения: изучение окрашенных микропрепаратов - (бактериологический метод диагностики)

Достоинства:

• Высокое разрешение;

• Простота настройки и использования.

Недостатки:

Необходимость фиксации и окраски препаратов.

Принцип действия:

Полезное увеличение x90. Имм. масло ↑апертуру объектива и разрешающую способность. Имеет коэффициент преломления как у предметного стекла 1.5, при этом Z = 0.2 мкм = 200 нм

5. Капсула, Строение, функции, методы выявления.

Капсула - слизистый слой, состоящий из кислых мукополисахаридов. Содержит большое количество связанной (гидратной) воды. Хорошо пропускает, но не задерживает водорастворимые вещества, в том числе красители.

Функции – адгезия, защита от фагоцитоза, вирулентность.

Иммунологические реакции и Окраска по Бурри-Гинсу:

Схема метода:

• Негативное контрастирование капсулы (по Бурри) - чёрная тушь (смешивается с исследуемой культурой и высушивается). 

• Фиксация в пламени спиртовки.

• Окраска тел микробных клеток (по Гинсу) - водный фуксин  1 мин.

• Промывка – вода. 

Принцип метода:

Капсула не воспринимает красители, поэтому её выявляют, создавая в препарате черный тушевый фон (метод Бурри). Дополнительная окраска тел а микробной клетки позволяет визуализировать капсулу (метод Бури-Гинса). 

6. Кислотоустойчивые бактерии: особенности строения и методы выявления.

• Кислотоустойчивые бактерии. Клеточная стенка некоторых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Подобные бактерии называют кислотоустойчивыми, их трудно окрашивать по Граму (хотя кислотоустойчивые бактерии рассматривают как грамположительные). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена. ( Основной краситель - карболовый фуксин Циля  3-5 минут при нагревании.

• Дифференцирующее вещество - раствор серной кислоты  5-10 сек.

• Промывка - вода 1-2 минуты.

• Дополнительный краситель - метиленовый синий 3-5 минут.

• Промывка – вода.

Кислотоустойчивые бактерии отличаются высоким содержанием липидов в клеточной стенке. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем в синий цвет.

Актиномицеты – бактерии способные к образованию длинных септированных или несептированных нитей (нитчатые бактерии) (актиномикоз)

7. Клеточная стенка, особенности строения, функциональное назначение.

Грамположительные бактерии имеют толстую, прочную, просто устроенную стенку (толщина более 50 нм) Основным компонентом клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин), построенный их остатком N-ацетил мурамовой кислоты. Прочность линейному полимеру придают поперечные тетрапептидные сшивки, соединяющие отдельные слои пептидогликана. С петидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые или липотейхоевые кислоты (от греч. teichos - стенка), молекулы которых представляют собой цепи из 8-50 остатков глицерола и рибитола, соединенных фосфатными мостиками. С пептидогликаном могут быть связаны белки (А, М, Т, R и др.). 

Грамотрицательные бактерии содержат очень небольшое количество пептидогликана, не имеющего поперечных сшивок. Над слоем муреина располагается периплазматическое пространство, играющее важную роль в обменных процесса (периплазматические ферменты) Далее располагается наружная мембрана, которая имеет строение, характерное для биологических мембран. Внешний листок наружной мембраны содержит липополисахарид (ЛПС), состоящий из трех компонентов: липида А, стержневой (базисной) части, или ядра, и полисахаридной цепи, образованной повторяющимися олигосахаридными последовательностями.

Функциональное назначение: поддержание формы клетки, защита, осуществление обмена между внутренней и внешней средой, питание.