15. Световой микроскоп. Показатели качества: разрешающая способность, увеличение.
1)тубус (окуляр, револьвер с объективами);
2)микро- и макровинты;
3)конденсор с винтом.
Разрешающая способность - минимальное расстояние между двумя точками, на котором они воспринимаются раздельно.
Увеличение
Полезное увеличение - такое увеличение, которое помогает выявить детали объекта. Связно с разрешающей способностью объектива и примерно определяется по формуле:
Уmax = 1000 х А,
где А- числовая апертура объектива
Бесполезное увеличение – не приводит к выявлению новых деталей строения, увеличивает искажения.
16. Спора, Строение, функция, методы выявления.
Споры бывают круглыми, овальными или эллиптическими; некоторые снабжены «рёбрами жёсткости», усиливающими устойчивость к механическим воздействиям. При микроскопическом исследовании споры выделяются высоким коэффициентом светопреломления, аналогичный таковому у обезвоженного белка. В зрелой споре различимы: центральный, плохо окрашиваемый участок (спороплазма), двухслойная ЦПМ и оболочка споры.
Спороплазма (протопласт споры) включает цитоплазму, бактериальную хромосому, системы белкового синтеза и некоторые другие (например, анаэробного энергообразования). Оболочка споры двухслойная: пространство между слоями заполняют гликопептидные полимеры, сходные с пептидогликанами, образующие сетчатую структуру (кортекс), проявляющую высокую чувствительность к лизоциму. Внутренний слой (стен ка споры) образован пептидогликанами, аналогичными таковым \ вегетирующей клетки. Внешний слой (собственно оболочка) образуют кератиноподобные белковые структуры с низкой проницаемостью. Экзоспориум. У некоторых бактерий материнская клетка образует экзоспориум — двух-трёхслойное желатинообразное покрытие образованное липопротеинами и углеводами и во многом аналогичное капсуле бактерий. При созревании споры экзоспориум может сохраняться в виде пустого и отстающего от споры «мешка».
Функции – сохранение генетического материалы при неблагоприятных условиях(защитная)
Схема метода:
Протравливание - раствор соляной кислоты 2-3 минуты при нагревании
Промывка - вода
Высушить и зафиксировать в пламени спиртовки
Окрасить по методу Циля-Нильсена
Принцип метода
Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но из-за более плотной оболочки спор, по сравнению с клеточной стенкой кислотоустойчивых бактерий, возникает необходимость в дополнительном протравливании препарата раствором соляной кислоты.
17. Темнопольный микроскоп. Принцип работы. Сфера применения.
Микроскоп построен по традиционной схеме. Отличительной особенностью является применение специального конденсора (кардиоид или параболоид) формирующего световой конус, использующийся для бокового освещения объекта. При использовании объективов с большой апертурой для устранения засветки поля в объектив вкладывается диафрагма.
Достоинства:
Возможность изучения живых микроорганизмов – изучение подвижности бактерий и простейших
Нет искажений, связанных с фиксацией и окраской препаратов
Недостатки:
Сложная настройка освещения
Высокие требования к качеству предметных и покровных стекол
Сфера применения: ультрамикроскоп для изучения подвижности живых неокрашенных микроорганизмов. Диагностика сифилиса (трепонема) и лептоспироза. Неокрашенные подвижные препараты.
Принцип работы: В объектив не попадают прямые лучи, в центре конденсора чёрная бумага (темнопольный конденсор) → эффект Тиндаля → светящиеся контуры мо на чёрном фоне.
18. Этапы развития микробиологии. Работы основоположников микробиологии. Становление микробиологии как науки происходило в три этапа. На первом этапе было установлено существование микробов в природе; на втором – дифференцированы виды микробов, на третьем – началось изучение иммунитета и профилактики инфекционных болезней, вызванных патогенными микробами. Описательный период. Этот период развития микробиологии берет начало от первых наблюдений голландского естествоиспытателя Антония ван Левенгука (1632–1723), который, изготовив микроскоп, увеличивающий объект в 160–300 раз, сумел увидеть и описать все основные формы бактерий, назвав их animalcula viva (живые зверьки). В 1695 г. был издан труд «Тайны природы, открытые Антонием Левенгуком». После исследований Левенгука были сделаны попытки доказать роль микробов в происхождении инфекционных заболеваний. В 1840 г. в печати появилась статья Ф. Генле «О миазмах и контагиях», где автор обосновал этиологическое значение микробов в происхождении инфекционных заболеваний, впоследствии названное триадой Генле–Коха: 1) предполагаемый возбудитель должен с постоянством обнаруживаться при определенной болезни и не встречаться при других заболеваниях и у здоровых людей; 2) патогенный микроб должен быть выделен из организма в чистом виде; 3) должна быть доказана способность микроба вызывать соответствующее заболевание у экспериментальных животных. В период описательной микробиологии были установлены возбудители фавуса (И. Шенлейн, 1839) и стригущего лишая (И. Груби, 1843), в крови больных животных обнаружены бациллы сибирской язвы (А. Поллендер, 1849; К. Давен, 1850). Физиологический период развития. Разрозненные факты описательного периода микробиологии были обобщены и приумножены основателем микробиологии и современной медицины французским ученым Луи Пастером (1822–1895), с именем которого связано развитие второго, физиологического периода микробиологии и эпохальные открытия сущности брожения (1857), невозможности самопроизвольного зарождения (1860), причин порчи пива и вина (1865), болезней шелковичных червей (1868), микробной обусловленности и заразности инфекционных болезней (1881), методов изготовления вакцин и способов предохранения от куриной холеры, сибирской язвы и бешенства (1882–1885). Большую роль в истории развития микробиологии сыграли труды немецкого ученого Р. Коха (1843–1910), который разработал метод выделения чистых культур микроорганизмов на плотных питательных средах, в частности ввел в практику агар–агар, желатину, свернутую сыворотку, кусочки овощей, предложил методы окраски бактерий анилиновыми красителями, усовершенствовал микроскоп, благодаря чему выделил и описал возбудителей сибирской язвы, туберкулеза и холеры, а его ученики и последователи к концу 19 в. открыли почти всех других возбудителей бактериальных инфекций. Иммунологический этап. Основоположником иммунологического этапа в развитии микробиологии является выдающийся русский ученый И. И. Мечников (1845–1916) – творец фагоцитарной теории иммунитета, за разработку которой ему была присуждена Нобелевская премия. Он положил начало учению об антагонизме микробов, о причинах преждевременного старения и возможности продления жизни человека, внес большой вклад в изучение туберкулеза, холеры, сифилиса. И. И. Мечников является создателем русской школы микробиологов, труды которых легли в основу развития современной медицины. Среди самых удачливых охотников за микробами следует выделить Ф. А. Леша, впервые обнаружившего дизентерийную амебу, и первооткрывателя возбудителя кожного лейшманиоза П. Ф. Боровского, основателей эпидемиологии и паразитологии в России Д. К. Заболотного, В. К. Высоковича и Е. И. Марциновского. Русские ученые стояли у истоков развития многих новых разделов и научных направлений в микробиологии. В частности, в конце 19 в. А. М Безредка положил начало учению о местном иммунитете. Труды С. Н. Виноградского, открывшего нитрифицирующие и азотфиксирующие бактерии, легли в основу развития сельскохозяйственной микробиологии. Д. И. Ивановский в 1892 г. открыл вирусную природу мозаичной болезни листьев табака и по праву является основоположником вирусологии.