10. Окраска по Граму. Техника и принцип метода. Кон-тест. Принцип метода и его практическое значение.

• Основной краситель -  генцианвиолет - 1 мин.

• Фиксатор  - раствор Люголя - 1 мин

• Дифференцирующее вещество - спирт этиловый 96⁰  - 5-10 сек

• Промывка - вода - 5-10 сек

• Дополнительный краситель - водный фуксин - 1 мин.

• Промывка - вода - 5-10 сек.

Генцианвиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки. Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой грамотрицаетльных – мало. Раствор Люголя фиксирует краситель путем образования комплекса пептидогликан-краситель-иод.

При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные остаются окрашенными в синий цвет.

Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет.

KOH – тест Принцип метода: в каплю 3% КОН вносят полную петлю исследуемой культуры. Растирают культуру петлей в течение 30 сек., периодически отрывая петлю от стекла. Щелочь разрушает клеточную стенку грамотрицательных бактерий, и клеточное содержимое выходит наружу, вследствие чего вязкость капли резко возрастает. Содержимое капли тянется за петлей до 3-10 мм. Грамположительные бактерии не лизируются и вязкость капли на стекле не изменяется. (добавляется щелочной раствор на пробу. Грамположительные клетки не изменяют свою структуру, а грамотрицательные – разрушается мембрана, повышается вязкость. Значение : визуализация и идентификация, морфология и структура, гр+/-)

Метод применим только при работе с чистой культурой

11. Основные группы микроорганизмов. Значение в патологии человека. Примеры.

1.Прокариота - организмы, не обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами.

1.1. Собственно бактерии – наиболее обширная группа паразитических и свободно живущих прокариота, обладающих жесткой клеточной стенкой (брюшной тиф; сибирская язва; газовая гангрена).

1.2. Актиномицеты – бактерии способные к образованию длинных септированных или несептированных нитей (нитчатые бактерии) (актиномикоз).

Значение в патологии человека - многие актиномицеты используются в качестве штаммов-продуцентов при производстве антибиотиков и ферментных препаратов).

1.3. Микоплазмы – бактерии, не имеющие клеточной стенки (атипичная пневмония; урогенитальный микоплазмоз).

1.4. Риккетсии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты (эпидемический сыпной тиф; клещевой риккетсиоз; пятнистая лихорадка скалистых гор; лихорадка цуцугамуши).

1.5. Хламидии – бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты. Отличаются от риккетсий сложным циклом внутриклеточного размножения (трахома; хламидийная пневмония).

1.6. Спирохеты – спирально извитые микроорганизмы. Отличаются наличием внутриклеточных фибриллярных структур (сифилис ;лептоспироз; боррелиоз Лайма).

2. Эукариота – организмы, обладающие оформленным ядром и внутриклеточными мембранными структурами.

2.1. Простейшие – одноклеточные эукариотические животные.

2.2. Низшие грибы – гетеротрофные одноклеточные и многоклеточные микроорганизмы.

3. Вирусы – неклеточная форма жизни.