89. Грибы рода Candida, биологическая характеристка. Кандидозы полости рта, методы диагностики, принципы этиотропной терапии

2)Дрожжеподобные грибы рода Кандида (Candida) насчитывают более 150 видов. Возбудителем кандидоза в большинстве случаев (является Candida albicans. Кандида относится к условно-патогенным микроорганизмам и является наиболее распространенной грибковой инфекцией. Клетки гриба имеют округлую форму. Кандида достаточно стойкий микроорганизм и способен обитать не только на слизистых оболочках, но и на коже и в окружающей среде. Грибы кандида аэробны и наиболее благоприятными характеристиками среды их обитания является PH 6,0-6,5 при температуре 21-37°С.Наличие в организме человека грибов кандида (C. Albicans) еще не означает развитие кандидоза. При приемлимом состоянии иммунитета развитие заболевания не происходит. Грибы рода Candida вызывают в человеческом организме кандидоз - заболевание кожи, слизистых оболочек и внутренних органов. Наиболее частое проявление этой инфекции поражение мочеполовой системы - урогенитальный кандидоз. Урогенитальный кандидоз не относят к инфекциям передающимся половым путем (ИППП), так как болезнь часто возникает без полового контакта. Кандидоз при отсутствии правильного лечения быстро переходит в хроническую форму, которая может сочетаться с кандидозом мочеполовой системы.Кандидоз ротовой полости (он же кандидозный стоматит или молочница) – это инфекционное заболевание, вызываемое грибками штамма Candida, которые при ослаблении защитных сил организма начинают активно размножаться. Эти грибки есть на слизистой оболочке каждого человека, но иммунная система контролирует их рост, поэтому никаких негативных последствий для здорового человека они не несут.Локализация Candida в полости рта разнообразная.Кандидоз может возникнуть вследствие лучевых воздействий, употребления алкоголя и наркотиков, оральных контрацептивов. В отдельных случаях кандидоз развивается вследствие инфицирования извне. Источником заражения является больной человек.Большое значение в развитии кандидоза придают состоянию слизистой оболочки рта и ее иммунитету. Возникновению кандидоза способствует хроническая травма слизистой оболочки рта острыми краями зубов, некачественными протезами, разрушенными коронками зубов и др. После установления диагноза врач в первую очередь назначает противогрибковые препараты. Одновременно с лечением противогрибковыми препаратами врачи советуют придерживаться диеты.Вопреки распространенному мнению, главным методом диагностики кандидоза до сих пор является микроскопия мазка с пораженных участков слизистой. ПЦР (ДНК - диагностика), популярная в последнее время, как правило, плохо подходит для диагностики кандидоза.Лабораторная

диагностика заболевания включает в себя:иммуно-ферментный анализ (ИФА),микроскопию мазка выделений,культуральную диагностику(посев),полимеразная цепная реакция (ПЦР)

90. Методы генетического анализа в микробиологии

Генетический анализ состоит в экспериментальном изучении отношений, существующих между бактериями (мутантами). Для определения этих отношений используют два основных приема:

1) рекомбинационный - определяет пространственное расположение генов (или мутаций) на генетической карте, т.е. картирование генома;

2) комплементационный - определяет функциональные отношения генов

(или мутантов).

Бактерии, способные к быстрому размножению, дают возможность затрачивать на эксперимент сравнительно небольшое время. Кроме того, методы отбора мутантов или рекомбинантов просты и доступны. Основной прием отбора - применение набора минимальных сред (например, с одной аминокислотой) в сочетании с посевом штампом-репликатором. Такой метод позволяет установить характер мутации (или рекомбинации) и расположение соответствующего гена на генетической карте. Наиболее часто применяются следующие методы картирования:

1) с помощью прерванной конъюгации (с посевом микробов на минимальные среды через определенные интервалы времени в процессе конъюгации);

2) с помощью трансдукции (т.е. с помощью фага);

3) с помощью трансформации (после искусственного разрушения бактерий-доноров изучают характер изменений бактерий-реципиентов).

Генетический анализ может проводиться и с помощью ДНК-(РНК)-зондов в реакции гибридизации. Этот метод важен не только с теоретической точки зрения, но и с практической - как наиболее специфичный метод идентификации микробов и вирусов.

ДНК-(РНК)-зонд - это одноцепочечный радиоактивномеченный (32Р и др.) фрагмент ДНК (РНК). Эти фрагменты нуклеиновых кислот получают: а) при рестрикции (расщеплении молекулы на две цепочки) участка ДНК (РНК) известных микроорганизмов, б) путем химического синтеза. Реакция гибридизации состоит из следующих этапов:

1) разрушение исследуемых микробов, денатурация и рестрикция ДНК (нужны одноцепочечные участки) и фиксация на полимерной пленке;

2) внесение ДНК-зонда. Если зонд комплементарен с ДНК исследуемых микробов, то произойдет связывание, т.е. гибридизация, несвязавшиеся зонды удаляют промыванием;

3) учет результатов - с помощью авторадиографии.

Другой важной реакцией, основанной на методах генной инженерии является цепная полимеразная реакция (ЦПР), применяемая в медицинской

микробиологии, вирусологии, иммунологии. Сущность метода заключается в получении из материала от больного не микроорганизма, а одноцепочечных фрагментов генома (ДНК), его биосинтезе с последующей идентификацией видоспецифических фрагментов молекулярно-генетическими методами. Биосинтез осуществляют в специальных физико-химических условиях. Реакционная смесь содержит матрицу (одноцепочечный фрагмент ДНК исследуемого возбудителя), нуклеотиды, праймеры (т.е. участки ДНК, с которых начинается биосинтез), фермент полимеразу. В результате ЦПР образуются копии ДНК исследуемых микроорганизмов, которые можно идентифицировать в реакции гибридизации.