1.2. ФорменНые элементы крови
1.2.1. Подсчет форменных элементов крови
В качестве унифицированных методов подсчета форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов) приняты два способа: подсчет в счетной камере и в автоматическом счетчике.
Подсчет в счетной камере осуществляется под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки. Кровь предварительно разбавляют в специальных смесителях (меланжерах) или пробирочным методом, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Заполняют разбавленной кровью счетную камеру и подсчитывают число форменных элементов. Зная объем камеры и степень разведения крови, рассчитывают число клеток крови в 1 мкл цельной крови.
Метод автоматического подсчета эритроцитов (лейкоцитов) производится с помощью счетчика форменных элементов. Это облегчает выполнение исследования и делает его более производительным. Принцип работы большинства счетчиков основан на кондуктометрическом методе. Определенное количество разведенной изотоническим раствором хлористого натрия крови пропускают через микроотверстие. Проходящая клетка увеличивает сопротивление между электродами, возникающий импульс передается на счетное устройство с цифровой индикацией.
1.2.1.1. Подсчет количества эритроцитов в счетной камере с использованием меланжеров для разведения крови
Цели работы: ознакомиться со счетной камерой Горяева, овладеть техникой подсчета эритроцитов, определить количество эритроцитов в донорской крови.
Объект исследования – донорская кровь.
Для работы необходимо: Донорская кровь, смеситель (меланжер) для эритроцитов, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия, стаканчик для разбавляющего раствора, микроскоп, вата.
Рис.
1. Смесители: а – для подсчета эритроцитов;
б – для подсчета лейкоцитов; 1 – капилляр;
2 –ампула; 3 - наконечник
Проведение работы. Ознакомиться с устройством меланжера и счетной камеры.
Меланжер для подсчета эритроцитов представляет собой капилляр с ампулообразным расширением и с бусинкой красного цвета внутри. На меланжере нанесены три метки: 0,5; 1,0; 101 (рис.1).
1. Разведение крови
В меланжер кровь набирают до метки «0,5». Излишки крови собирают марлевым тампоном.
Затем опускают кончик капилляра смесителя в стаканчик с гипертоническим (3%) раствором хлорида натрия и набирают его (раствор) с помощью резиновой трубки и мундштука до метки «101», чем достигают разведения в 200 раз. Гипертонический раствор хлорида натрия вызывает плазмолиз эритроцитов, повышающий оптическую плотность клеток. Во избежание нарушения точности анализа, нельзя допускать попадания воздуха в капилляр.
Покачиванием смесителя, отверстия которого зажимают между пальцами, кровь тщательно перемешивают для равномерного распределения эритроцитов.
2. Заполнение счетной камеры
Рис. 2. Счетная камера: А - вид сверху. Б - вид сбоку. В - сетка Горяева. 1 - маленький квадрат, 2 - большой квадрат.
Счетная камера (рис.2) состоит из толстого прямоугольной формы стекла с двумя сетками Горяева, нанесенными на средние площадки камеры. Кнаружи от желобков, образующих букву «Н», находятся две прямоугольные пластинки, к которым прикладывается покровное стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 малых. Сторона малого квадрата составляет 1/20 мм, площадь - 1/400 мм2, глубина камеры - 1/10 мм. Следовательно, объем камеры над малым квадратом равен 1/4000 мм3.
Незаполненную счетную камеру помещают под микроскоп и сначала под малым, а затем большим увеличением рассматривают сетку, находят большие и малые квадраты.
Затем счетную камеру и покровное стекло промывают водой, протирают марлевым тампоном, смоченным эфиром, спиртом и сухой полотняной салфеткой.
Придавливают покровное стекло к боковым поверхностям камеры (см. описание камеры).
Перед заполнением камеры выпускают на ватный тампон две-три капли содержимого из капилляра смесителя, затем заполняют камеру: наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку у края покровного стекла. В силу капиллярности жидкость равномерно распределится над сеткой.
После заполнения камеру оставляют на одну минуту для равномерного распределения и оседания эритроцитов.