Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Руководство к проведению лабораторных работ по нормальной физиологии-2005_I семестр.doc
Скачиваний:
8
Добавлен:
01.07.2025
Размер:
2 Мб
Скачать
☆

1.2.1.3. Подсчет лейкоцитов в счетной камере

с использованием меланжеров для разведения крови

Цель работы: ознакомиться с техникой подсчета лейкоцитов.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимо: Донорская кровь. Смеситель (меланжер) для лейкоцитов, камера с сеткой Горяева, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп, вата.

Проведение работы. Взятие и разведение крови осуществляется с помощью смесителя для лейкоцитов (рис.1.). Смеситель имеет меньший объем ампулы по сравнению со смесителем для эритроцитов и содержит белую бусинку. Набирают кровь до метки «0,5», а затем - уксусную кислоту до метки «11», чем достигают разведения в 20 раз. Для разрушения оболочки эритроцитов и подкрашивания ядер лейкоцитов после перемешивания содержимого ждут 5 минут.

Заполнение камеры проводят так же, как описано в работе 3.1.1. Подсчет лейкоцитов осуществляется в 25 больших квадратах, что соответствует 25  16 = 400 малым квадратам. Количество лейкоцитов в 1мкл крови вычисляют по формуле:

Х = (А 4000 20) / 400,

где А - найденное количество лейкоцитов в 400 малых квадратах;

20 - степень разведения крови;

1/4000 мм3 - объем разведенной крови над малым квадратом.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови, полученный результат умножают на 106.

Ошибка метода составляет в среднем 7%.

Источники ошибок при подсчете лейкоцитов те же, что и при подсчете эритроцитов. Кроме того, в число лейкоцитов могут войти и эритробласты, если они имеются в крови. Их наличие у испытуемого выясняют при изучении морфологии клеток в фиксированных и окрашенных препаратах.

Оформление протокола. Коротко описать метод, указать, чем разводят кровь для подсчета лейкоцитов; записать формулу расчета количества лейкоцитов - провести ее анализ. Выписать нормальные значения количества лейкоцитов у мужчин, женщин и новорожденных.

1.2.1.4. Подсчет лейкоцитов с использованием пробирочного

метода разведения крови

Цель работы: ознакомиться с пробирочным методом разведения крови.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимы: донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости на 1 мл, камера с сеткой Горяева, 4-5% раствор уксусной кислоты (подкрашенный метиленовым синим), дистиллированная вода, микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4мл 5% раствора уксусной кислоты. Капиллярной пипеткой от гемометра Сали набирают кровь до метки (20 мкл) и осторожно выдувают ее в разводящую жидкость; промывают этой жидкостью капилляр, пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Таким образом, достигается разведение крови в 20 раз. После взятия крови капиллярная пипетка должна быть промыта несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет лейкоцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. Источник ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.